Микробиологические методы исследования поверхностей

Микробиологическое исследование различных поверхностей проводят с целью определения общей микробной загрязненности (КОЕ/см²), выделения и идентификации микроорганизмов, находящихся на данной поверхности, выделения санитарно-показательных микроорганизмов, например, бактерий группы кишечной палочки (БГКП). Для этого используют метод смывов или метод отпечатков.

Метод смывов заключается в протирании поверхности размером 100 см² или 50 см² стерильной марлевой салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом растворе или стерильной водопроводной воде. Салфетки готовят из куска марли размером 8х8 см, который свертывают вчетверо таким образом, чтобы получился конверт размером 2х2 см. марлевые салфетки размещают веером в чашке Петри от периферии к центру и автоклавируют при 1,0 атм. в 30 минут.

Для каждой салфетки готовят пробирки с 10 мл стерильного физиологического раствора или стерильной водопроводной воды, в который добавляют 3-5 стерильных стеклянных бусинок.

Для смыва удобно использовать трафарет из нержавеющей стали с внутренним квадратом 10х10 или 5х5 см. Трафарет предварительно обжигают на спиртовке, охлаждают, накладывают следуемую поверхность и протирают ее внутри квадрата салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом растворе или стерильной водопроводной воде. Если поверхность сложной конфигурации, то смыв проводят без применения трафарета, но с определением площади протираемой поверхности.

После протирания поверхности салфетку возвращают в пробирку, в которой она была смочена, и встряхивают в течение 10 минут. После этого смывную жидкость засевают на питательный агар (для определения общего количества микроорганизмов), на среду Эйкмана (для выделения санитарно-показательных микроорганизмов) или на специальные среды (для выделения определенных видов микроорганизмов). Если предполагают, что поверхность сильно загрязнена микроорганизмами, то смывную жидкость предварительно разбавляют методом серийных десятикратных разведений.

После встряхивания 1,0 мл смыва переносят стерильной пипеткой на дно пустой стерильной чашки Петри и заливают 15-20 мл расплавленного питательного агара, остуженного до температуры 40 - 45°С. Не поднимая чашки от стола, плавными круговыми движениями перемешивают исследуемый материал со средой, закрывают крышкой и оставляют до застывания среды. После застывания среды чашку переворачивают кверху дном и термостатируют при оптимальной температуре.

После 24-48 часового термостатирования подсчитывают число выросших колоний и вычисляют уровень общего микробного заражения по формуле:

где: С - количество микроорганизмов на 1 см², поверхности;

А - число колоний, выросших на чашках Петри при данном разведении;

В - кратность разведения смывной жидкости;

100 - площадь смыва в см².

Выделение бактерий группы кишечной палочки после посева смыва на среду Эйкмана проводят также, как при микробиологическом исследовании воды.