Микробиологическое исследование воды

Микробиологическое исследование воды начинается с отбо­ра проб. При исследовании воды открытых водоемов пробы отбирают с различной глубины с помощью специальных приспособлений - батометров в стерильную посуду. Для отбора водопроводной воды или воды из родников и колодцев используют стеклянные бутылки емкостью 0,5 л с ватно-марлевыми пробками.

В лаборатории анализ исследуемой воды проводят не позднее 2-х часов после отбора, или не позднее 6 часов при хранении пробы при температуре 3°С-4°С.

Микробиологическое исследование воды складывается из определения общего количества микроорганизмов (КОЕ) в 1 см³ (микробное число) и выявления санитарно-показательных микроорганизмов.

Определение общего количества микроорганизмов проводят методом серийных разведений или прямым посевом определенного количества воды на плотные питательные среды. Выращивание микроорганизмов проводят в термостатах при различных температуру для выявления мезофильных и термофильных микроорганизмов.

В качестве санитарно-показательных микроорганизмов чаще всего используют бактерии группы кишечной палочки (БГКП), которые выделяют, в основном, двумя методами: методом бродильных проб и методом мембранных фильтров.

Методом бродильных проб устанавливают коли-титр (наименьший объем воды, в котором обнаруживается кишечная палочку методом мембранных фильтров - коли-индекс (наименьшее количество кишечных палочек в 1 литре воды). По специальной таблице коли-титр можно перевести в коли-индекс и наоборот.

Исследования воды бродильным методом осуществляют поэтапно. Вначале производят посев в глюкозо-пептонную среду Эйкмана (реп- 27) с индикатором Андреде и поплавком (среда накопления). Для исследования одной пробы воды берут 3 колбы с 10 мл концентрированной среды, три пробирки с 1 мл концентрированной среды и три пробирки с 10 мл разведенной питательной среды. В колбы и пробирки соответственно вносят по 100, по 10 и по 1 мл исследуемой воды. Посевы в течение 16-18 часов инкубируют в термостате при 37°С.

Второй этап начинается с учета результатов роста на среде Эйкмана. Для дальнейшего исследования отбирают колбы и пробирки, в которых наблюдается изменение цвета среды и газообразование (газ в поплавках). Из этих колб и пробирок делают пересевы на плотную питательную среду Эндо (рец. 28). Пересев делают бактериологической петлей штрихами. Посевы в течение 16-18 часов инкубируют в термостате при 37°С.

При росте на среде Эндо характерных красных с металлиеским блеском колоний кишечных палочек из них делают мазки по Граму для микроскопирования. Выросшую культуру изучают также по оксидазному тесту. Для этого фильтровальную бумагу смачивают (перед употреблением) раствором d-нафтола и диэтил–n-фенилендиамидом и накладывают на колонии. Кишечная палочка не обладает оксидазной активностью, и поэтому не изменяет цвет бумаги (отрицательный результат оксидазной пробы). Наличие грамотрицательных палочек и отрицательная оксидазная проба свидетельствуют о росте кишечной палочки.

Для установления фекального загрязнения посевы культивируют в термостате при 43°С, так как кишечная палочка холоднокровных не растет при данной температуре.

Для подтверждения фекального загрязнения иногда используют третий этап – пересев уколом подозрительных колоний со среды Эндо на розоловатый дифференциальный агар (рец. 29). Рост кишечной палочки сопровождается пожелтением и разрывом среды.

Оценку исследований бродильным методом осуществляют по таблице 6.

Метод мембранных фильтров менее трудоемкий и широко используется в микробиологии для выделения бактерий группы кишечных палочек и определения коли-индекса.

Таблица 6

Расчет величины коли-титра и коли-индекса воды

Количество положительных результатов Анализа воды из	Коли-титр	Коли-индекс
3 флаконов по 100 мл	3 пробирок по 10 мл	3 пробирок по 1 мл
			Более 333
			0,9
			Менее 0,9	Выше 1100

Определенный объем исследуемой воды фильтруют через специальные фильтры, задерживающие кишечную палочку, затем фильтр помещают на плотную питательную среду Эндо, инкубируют в термостате с целью обнаружения фуксино-красных колоний, характерных для кишечной палочки.

Для фильтрации применяют стерильные градоколовые фильтры из нитроцеллюлозы, помещенные в дистиллированную воду, стерильный фильтр-воронку Зейтца.

Через мембранные фильтры №2 и №3 с диаметром фильтрующей поверхности около 30 мм и средней величиной пор 0,5-0,7 мкм пропускают такое количество воды, чтобы на фильтре получилось не более 50 колоний кишечных палочек. Поэтому объем пробы из централизованных источников водоснабжения (водопровод, артезианские скважины) может составлять 300-500 мл, а для нецентрализованных источников (колодцы, родники и т.п.) - от 10 до 100 мл. При анализе загрязненных вод определение коли-индекса следует применять после их предварительного разведения.