Рост микроорганизмов на плотной питательной среде

На плотных питательных средах микробы образуют различные по форме и величине колонии, которые представляют собою видимые скопления особей одного вида микроорганизмов, образующихся в результате размножения одной или нескольких клеток.

Для изучения свойств колоний микробы культивируют на питательном агаре в чашках Петри. Если выращиваемый микроорганизм не растет на питательном агаре, то используют специальные питательные среды. При посеве материала стараются получить изолированные колонии. Чашки с посевом просматривают вначале невооруженным глазом или через лупу, затем помещают их на столик стереомикроскопа и просматривают в проходящем или отраженном свете при различном увеличении.

Колонии характеризуют по следующим признакам: величине, форме, прозрачности, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, структуре и консистенции.

Величина колонии определяется ее диаметром. В зависимо­сти от диаметра различают колонии:

- точечные (диаметр менее 1 мм);

- мелкие (диаметр 1-2 мм);

- средние (диаметр 2-4 мм);

- крупные (диаметр от 5 мм и более).

Форма колонии бывает правильно круглая, неправильная (амебовидная), ризоидная, мицелевидная, складчатая, концентрическая сложная и др.

Характер контура края определяют при рассмотрении колонии под лупой или в стереомикроскоп. Контуры края колонии могут быть:

- ровные, четко выраженные;

- фестончатые, состоящие из крупных, слегка округлых или уплощенных зубцов правильной формы;

- волнистые, с мелкими зубцами;

- зазубренные, состоящие из острых зубцов различной формы и величины;

- бахромчатые, реснитчатые, нитчатые, ветвистые, имеющие тонкие ворсинки;

- расплывчатые, когда края колонии нечетко отграничены от поверхности среды.

Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе. Определяется рельеф колонии невооруженным глазом, лупой или стереомикроскопом при рассматривании сверху и сбоку. В зависимости от рельефа различают:

- каплеобразные и куполообразные колонии правильно круглой формы, с различно выраженной степенью выпуклости, которые в вертикальном разрезе представляют собою сегмент шара и отличаются только длиной радиуса. Колонии слабо выпуклые, имеют большую, куполообразные - меньшую длину радиуса;

- колонии плоско-выпуклые с плоским верхом, пологими или круто обрывающимися краями, имеют в вертикальном разрезе форму трапеции;

- колонии конусообразные, имеющие в вертикальном разрезе форму треугольника;

- колонии с приподнятой в виде соска серединой и валиком по периферии;

- колонии с вдавленным центром;

- колонии плоские, стелющиеся по поверхности среды.

Поверхность колонии изучают с помощью лупы или стерео-микроскопа. Поверхность колоний бывает матовая или блестяще с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая, морщинистая. Гладкие колонии обозначают буквой S (smooth), шероховатые - R (rough), что обозначает соответственно «гладкий» и «шероховатый». Механизм формирования гладких и шероховатых колоний обусловлен различием процессов клеточного деления. Микробные клетки в колониях S-форм располагаются, соприкасаясь своими боковыми поверхностями. Клетки R-форм, сохраняя при делении цитоплазматические мостики, образуют цепочки, которые, накладываясь друг на друга, обусловливают шероховатую поверхность и неровный край колонии.

Переход S-форм в R-формы наблюдается при микробной диссоциации. Явление диссоциации у микробов возникает под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды, антибиотических и химиотерапевтических веществ.

Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микроба. Пигментообразующие микроорганизмы образуют колонии различных видов: фарфорово-белые, кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, лимонные, черные и т.д. Если пигменты водорастворимые, то окрашивается вся среда, а если нерастворимые, тогда окрашивается только микробная масса колонии. Пигментообразование лучше определять на плотных питательных средах.

Структура колоний определяется в проходящем свете стереомикроскопа. У пигментированных колоний и колоний, не пропускающих света, она не определяется. По характеру структуры различают следующие виды колоний:

- гиалиновые - бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры;

- зернистые, которые в зависимости от величины зерен, разделяются на мелко - и грубозернистые;

- нитевидные или волокнистые, характеризующиеся наличием длинных, густо переплетающихся нитей в толще колонии.

Колонии бывают однородные и неоднородные. Строение первых одинаково во всех частях, у вторых - центральная часть отличается от периферической или отдельные сектора имеют строение, неодинаковое с остальной массой.

Консистенцию колонии, определяющую ее физическое состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериологической петлей. По характеру консистенции колонии бывают:

- пастообразные, легко снимающиеся и размазывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла;

- вязкие, маслянистые или слизистые, прилипающие или тянущиеся за петлей;

- волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки,

соответствующей величине и форме колонии;

- хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли.