Техника посева и пересева микроорганизмов

Посевом называют внесение культуры микроорганизмов (инокулята) в стерильную питательную среду. Пересев заключается в переносе культуры микроорганизмов, выращенной на одной пита­тельной среде, на другую свежую питательную среду. Посевы и пересевы осуществляют в боксе, при этом ограничивают движе­ния, возбуждающие движение воздуха. Во время посевов и пересе­вов соблюдают требования личной безопасности.

Техника посева зависит от консистенции питательной среды, характера засеваемого материала и цели исследования. Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии петлей жидкость должна образовывать в кольце петли тонкую прозрачную пленку. Петлю с находящимся на ней материалом погружают в пи­тательную среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенке сосуда, а затем смывают жидкой средой.

Пипетками (пастеровскими или градуируемыми) пользуются в том случае, когда материал засевают питательную среду в большом или точно отмеряемом объеме.

Посев микроорганизмов из пробирки в пробирку. При пересеве из одной пробирки в другую обе пробирки держат в на­клонном положении в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы все операции осуществлялись под контролем глаза. Причем пробирку, из которой берут посевной материал, держат ближе к себе. Пересевы проводят над пламенем горелки, чтобы не допустить попадания в посевной материал посторонних мик­роорганизмов из воздуха.

Перед посевом прокаливают докрасна проволоку бактериологической петли и обжигают примыкающую к петле часть держателя. Петлю держат вертикально в пламени горелки, чтобы вся проволока была раскалена. После прокаливания петлю остужают, прикасаясь к внутренней поверхности пробирки. Пробки обеих пробирок одновременно захватывают мизинцем и мякотью ладони правой руки и плавно, легкими винтовыми движениями извлекают над пламенем горелки. Затем петлей или пипеткой материал переносят из одной пробирки в другую, не касаясь стенок, и распределяют в питательной среде.

Петлю и пипетку держат как авторучку. Пипетку извлекают из упаковки за верхний конец, берут средним или большим пальцем правой руки, не касаясь той части пипетки, которая будет контактировать с инокулятом или питательной средой.

Во время работы пробирки следует держать в наклонном положении, чтобы в исследуемый материал или в стерильную среду не попали посторонние микроорганизмы из воздуха или посторонних предметов. При этом необходимо следить, чтобы среда не касалась пробки и не вылилась. Окончив посев, петлю прожигают, чтобы уничтожить оставшиеся на ней микроорганизмы, и ставят в штатив. Пробирки одновременно закрывают, предварительно профламбировав их края и ту часть пробок, которая входит в горлышко пробирки. Использованные пипетки, не касаясь окружающих предметов, опускают в сосуд с дезинфицирующим раствором (1%-2% водный раствор хлорамина или 5% водный раствор фенола).

В верхней части пробирок карандашом по стеклу (стеклографом) подписывают название засеянного материала, ставят номер анализа или проставляют дату посева.

Посев микроорганизмов из пробирки в чашки Петри. Пробирку держат в наклонном положении в левой руке между большим и указательным пальцем. Правой рукой берут петлю или пипетку. Непосредственно перед взятием материала бактериальную петлю прокаливают на огне. Для того чтобы остудить горячую петлю, ее погружают в конденсационную жидкость внутри пробирки или прикасаются к поверхности питательной среды свободной микроорганизмов (остуженная петля при соприкосновении с агаровой средой не вызывает ее расплавления). Мизинцем и мякотью ладони правой руки вынимают пробку из пробирки. Края пробивки при вынимании пробки прожигают. Набирают материал для посева и вносят его в чашку Петри.

Чашки Петри при пересеве должны лежать на столе вверх крышкой. Крышку фиксируют большим, средним и указательным пальцами и приоткрывают настолько, чтобы в образовавшуюся щель свободно входили петля или пипетка. Полностью крышку с чашки Петри во время работы не снимают во избежание попада­ния посторонних микроорганизмов в стерильную питательную среду или исследуемый материал.

Посевной материал из пипетки выливают на питательную среду в центр чашки Петри и распределяют его шпателем Дригальского или посредством разного наклона чашки. Если посевной мате­риал взят петлей, то его размазывают по поверхности плотной пи­тательной среды. При этом диск петли должен плашмя лежать на поверхности среды, а посев проводят без нажима, чтобы не повре­дить питательную среду.

После окончания посева на чашках Петри со стороны дна стек­лографом подписывают название засеянного материала, ставят номер анализа или проставляют дату посева.

Посев на скошенный питательный агар. Петлю с нахо­дящимся на ней материалом вводят в пробирку до дна, опускают на питательную среду плашмя и скользящим движением от грани­цы конденсата проводят зигзагообразную линию.

Посев шпателем на среду в чашки Петри. Исследуемый материал петлей наносят на поверхность питательной среды у края чашки и затем шпателем или тампоном распределяют его равно­мерно по всей поверхности. Надавливать на питательную среду не следует, так как ее можно повредить. По окончании посева стек­лянный шпатель или тампон помещают в дезинфицирующий раствор, а металлический прокаливают в пламени горелки.