Окраска внутриплазматических включений

Внутриплазматические включения формируются в процессе жизнедеятельности микроорганизмов в зависимости от условий культивирования и не являются постоянными компонентами клетки. Это могут быть жироподобные вещества, волютин, гликоген, крахмал, гранулеза, кристаллы щавелевой кислоты и др. В зависимости от характера исследуемых включении применяют различные методы окраски.

Окраска гликогена и гранулезы

На предметное стекло пастеровской пипеткой наносят каплю микробной суспензии и в нее добавляют каплю концентрированного раствора Люголя (рец. 14). Смесь выдерживают в течение 15 минут и накрывают покровным стеклом (избыток жидкости уда­ляют полоской фильтровальной бумаги). Препарат микроскопируют с иммерсионной системой. Скопления гранулезы окрашиваются в синий, а гранулы крахмала - в красно-коричневый цвет.

Для выявления гликогена можно использовать клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae, а гранулезы - Bacillus mycoides.

Окраска жироподобных веществ

Каплю густой микробной суспензии наносят пастеровской пи­петкой на обезжиренное предметное стекло, добавляют каплю 40% раствора формалина и выдерживают 5 минут. В смесь добав­ляют каплю метиленового синего и после 10-минутной выдержки добавляют каплю спиртового раствора судана (Ш). После пятиминутной выдержки смесь накрывают покровным стеклом (избыток жидкости удаляют полоской фильтровальной бумаги) и микроскопируют с иммерсионной системой. Клетки бактерий окрашиваются в синий цвет, а включения жира - в розовый цвет.

Для выявления жироподобных веществ можно использовать клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

Окраска волютина по Омелянскому

1. Готовят мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени горелки.

2. На фиксированный мазок пипеткой наносят карболовый фуксин Циля и окрашивают в течение 1 минуты.

3. По окончании окрашивания раствор сливают, препарат промывают дистиллированной водой и помешают в стаканчик с 1% раствором серной кислоты на 20-30 секунд. В течение этого времени препарат многократно погружают в стаканчик для полного смыва красителя. После этого препарат промывают дистиллированной водой.

4. С препарата сливают остатки дистиллированной во докрашивают его метиленовым синим в течение 0,5 - 1 минуты.

5. Препарат промывают дистиллированной водой, высушива­ют и микроскопируют с использованием маслянно-иммерсионного объектива.

На препарате волютин окрашен в красный, а цитоплазма - в синий цвет.

Для выявления волютина можно использовать клетки дрож­жей Saccharomyces cerevisiae.