Требования к умениям бакалавра. 1.Биохимические механизмы переваривания, всасывания углеводов и липидов

Знать:

1.Биохимические механизмы переваривания, всасывания углеводов и липидов.

2. Распространенные ферментопатии пентозофосфатного шунта, глюконеогенеза,обмена фруктозы и жирных кислот.

3.Причины и молекулярные механизмы развития сахарного диабета, его диагностику и осложнения.

4.Изменение углеводного и липидного обмена при стрессовых реакциях в животной и растительной клетке.

Уметь:

Готовить образцы для анализа

Проводить качественный и количественный ферментативный анализ

Экстрагировать гликоген из ткани животного, осуществлять его ферментативный гидролиз и обнаружение.

Записывать ключевых реакции глюконеогенеза, окислителной стадии пентозофосфатного шунта, β-окисления.

Методика опыта и реактивы. а) кашица мышеч­ной ткани. Мышцы только что убитого кролика, крысы или лягушки нарезают ножницами на маленькие кусочки (на холоду). Кашицу готовят непосредственно перед употреблением, растирая нарезанные мышцы с неболь­шим количеством дистиллированной воды; б) фосфат­ный буфер рН 8,04. Готовят два раствора: I — рас­твор Na₂HP0₄.2H₂0 (11,876 г соли в 1 л); II — раствор КН₂Р0₄ (9,078 г соли в 1 л). Для получения бу­ферной системы (рН 8,04) смешивают 95 мл первого раствора с 5 мл второго; в)метафосфорная кислота, 5°1₀-ный раствор; г)гликоген или крахмал, 0,5°1₀-ный раствор; д)вазелиновое масло; е)гидрат окиси кальция (Са(ОН)г • Н₂0 ), в порошке; ж)сернокислая медь, 15%-ный раствор; з)серная кислота, концентрирован­ная; и)гваякол (монометиловый эфир пирокатехина), 0,2°/₀-ный спиртовой раствор; к)тиофен, 10—20 капель препарата растворяют в 100 мл этилового спирта.

В две пробирки вносят по 0,5 г свежеприготовленной мышечной кашицы и 3 мл фосфатного буфера (рН 8,04). Первая пробирка служит контрольной, вторая — опыт­ной. В контрольную пробирку для инактивации фермен­тов добавляют 2 мл 5%-ного раствора метафосфорной кислоты и 1 мл дистиллированной воды. Во вторую про­бирку вливают 1 мл 0,5%-ного раствора крахмала или гликогена, затем в обе пробирки добавляют по 1 мл вазелинового масла (для защиты реагирующих веществ от кислорода воздуха) и ставят на 1 ч в термостат при температуре 36,5—37° С. После часа инкубации пробир­ки вынимают из термостата и во второй инактивируют ферменты добавлением 2 мл 5%-ного раствора метафос­форной кислоты. Контрольную и опытную пробы филь­труют через бумагу в сухие пронумерованные пробирки. Для осаждения углеводов к фильтратам прибавляют по 0,5 г гидрата окиси кальция и 1 мл 15%-ного раствора сернокислой меди, потом пробирки ставят на 10—15 мин., время от времени взбалтывая, после чего снова фильт­руют.