Количественное определение нуклеиновых кислот

Принцип метода

Метод основан на выделении рибонуклеиновых РНК) и дезоксирибонуклеиновых (ДНК) кислот и на дальнейшем их анализе прямыми и косвенными методами. К прямым методам относятся такие, которые включают гидролиз нуклеиновых кислот с последующим выделением из гидролизатов пуринов и пиримидинов и определение их хроматографический методом. Хроматография позволяет производить точный микроанализ нуклеиновых кислот. Исследование пуринов и пиримидинов проводят в ультрафиолетовом свете, наблюдая флуоресценцию пятен на хроматограммах или в экстрактах, полученных из соответствующих участков хроматограмм. Кроме хроматографического метода, применяют также способ электрофореза на бумаге.

К непрямым (косвенным) методам относятся такие, в которых нуклеиновые кислоты определяют по количеству освобождаемого Н₃Р0₄ в процессе их гидролиза и по количеству пентоз или по содержанию азота в нуклеиновых кислотах, определяемому методом Кьельдаля.

Методический инструментарий преподавателя

Вопросы

1.Напишите структурные формулы следующих соединений: а) аллантоин б) аллантоиновая кислота в) карбамиласпарагиновая кислота г) инозин-5-фосфат.

2. Дайте характеристику рестриктаз. Приведите примеры их действия.

3. Какой процесс катализирует РНК-зависимая ДНК-полимераза. В чем его суть?

4. Как происходит наращивание одноцепочечной полимеразной цепи в процессе биосинтеза ДНК?

6. Из каких соединений строится пуриновый цикл?

7. Напишите уравнения реакций и укажите ферменты, катализирующие

процессы:

уридин + Ф = урацил + рибозо-1-фосфат

уридин + НАДН+Н+ = дигидроуридин + НАД+

8. Каким путем осуществляется превращение аденина в мочевую кислоту?

9. Назовите основные этапы биосинтеза уридинмонофосфата.

-активные формы: фронтальный опрос; доклады по рефератам «Строение биологических полимеров», «Перекисное окисление липидов».

-инерактивные формы: эвристическая беседа «Эссенциальные жирные кислоты. Простогландины»

Средства контроля: Тест Нуклеиновые кислоты (см. Тестовый контроль знаний по биохимии: методическое пособие. – Ульян. гос. пед. ун-т им. И. Н. Ульянова. – Ульяновск: УлГПУ, 2010. - 28 с.)

Содержание внеаудиторной работы бакалавра при подготовке к занятию

1.Владеть содержанием вопросов (по лекции).

2.Повторить основы пространственного строения нуклеиновых кислот.

3.Повторить вопрос о химическом строения нуклеиновых кислот.

4.Подготовиться к диагностической самостоятельной работе в форме опроса и теста.

5.Изучить термины по данной теме

Литература

1. Филиппович Ю.Б., Коничев А.С., Севостьянов Г.А., Кутузова Н.М. Биохимические основы жизнедеятельности человека. - М.: Владос, 2005. - 407 с.

2. Митякина Ю.А. Биохимия: учебное пособие. - М.: РИОР, 2005.- 113 с. (Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.knigafund.ru/books/28653).

3. Тестовый контроль знаний по биохимии: методическое пособие. – Ульян. гос. пед. ун-т им. И. Н. Ульянова. – Ульяновск: УлГПУ, 2010. - 28 с.