Приборы для количественного учета пцр в режиме реального времени

-(REAL-TIME PCR)

Приборы для оценки ПЦР в режиме реального времени представляют собой своеобразный гибрид амплификатора и флюориметра и позволяют оценивать динамику ПЦР прямо в закрытых пробирках по мере накопления продукта ампли­фикации и проводить количественный ПЦР-анализ. Специфичность сигнала при ПЦР в реальном времени обусловлена применением специальных ДНК-зондов с флюоресцентной меткой. В процессе ПЦР по мере синтеза новых и новых копий искомого участка гена происходят специфическое связывание этой меченой цепочки нуклеотидов и ее разрушение с выходом красителя в окружающую среду. По мере протекания ПЦР светочувствительные элементы снимают показатели с каждой из пробирок и вводят эти данные в память компьютера. При этом строится динамическая кривая накопления ПЦР-продукта по отдельным пробам.

Объемы анализируемых проб, время анализа и температура измерений соот­ветствуют таковым для обычной ПЦР. Тем не менее в этом режиме не требуется дополнительное время на процедуры, связанные с электрофорезом, так как кри­вые накопления продуктов реакции доступны сразу по окончании real-time PCR. Калибровка зависит от типа имеющегося прибора. Она требуется для оптимизации параметров оптического блока и выравнивания показателей по отдельным лун­кам, осуществляется с теми флюорохромами, которыми помечены применяемые ДНК-зонды.

Количественная оценка ДНК или РНК патогенного микроорганизма в кли­нических образцах бывает исключительно важна для прогноза заболевания и контроля терапии. Эта технология активно внедряется в российские клинико-диагностические лаборатории.

Кроме возможности количественного учета результатов реакции, к несо­мненным достоинствам real-timePCR следует отнести высокую технологичность исследования и снижение вероятности загрязнения помещений лаборатории про­дуктами амплификации