Вектори на основі бактеріофага

Фагові вектори більш ефективні для клонування великих фрагментів ДНК. Найрозповсюдженими векторами для E. coli є бактеріофаг λ і М13.

Бактеріофаг λ може існувати в 4-х різних формах:

-лінійна - геном перебуває всередині фагової частки;

-кільцева - утворюється після введення фага в клітину;

-інтегрована форма - лінійна ДНК профага є пермутованою відносно ДНК фагової частки.

-конкатемерна форма - виникає під час реплікації ДНК фага λ по типу колеса, що котиться. Виходять довгі конкатемери, які складаються з безлічі копій генома бактеріофага λ, які з'єднуються по cos-сайтах.

Етапи отримання фагових векторів

1. Розмноження фагів на клітинах штамів, що несуть відповідний транспозон в якому –небудь репліконті.

2. Зараження фаголізатом чутливих бактерій.

3. Отримання в результаті трансдукції бактерій, що несуть ознаку, яка була властива транспозону.

4. Відбір серед бактерій варіантів, що є лізигенними за фагом, що містить транспозон.

Вектори на основі бактеріофага λ:

Вектори-впровадження -вектори, що несуть 1 сайт рестрикції для обраної рестриктази (один розріз-одна вставка). максимальна ємність 15 т. н. п.

Вектори-заміщення - несуть як мінімум 2 або більше сайти рестрикції ( два розрізи і вставка (заміщення) фрагмента). Їхня ємність ≈ 20 т. н. п.