Ж) ДНК-полімераза фага Т4, ДНК-полімераза I E. coli

ДНК-полімераза І має 3 види активності:

полімеразна активність у напрямку 3’→5’

екзонуклеазна активність у напрямку 5’→3’

екзонуклеазна активність у напрямку 3’→5’

Можна одночасно провести гідроліз 5’→3’, починаючи з 5’-кінця розриву (ніка) в 2-ланцюговій ДНК і полімеразну реакцію в напрямку 3’→5’ на іншому кінці розриву. Синтез ДНК не відбувається: нік тільки переміщується вздовж ланцюга (нік-трансляція). Нік-трансляцію використовують для введення радіоактивних міток у ДНК.

Від ДНК полімерази І за допомогою трипсину (субтиліну) виділяють фрагмент Кленова, що зберігає полімеразну та екзонуклеазну 3’→5’ активність.

Використовується для добудування липких кінців, для введення радіоактивної мітки в зону липких кінців, для синтезу другого ланцюга ДНК на кДНК; для гідролізу 3’-липких кінців, які утворилися рестрактазами.

ДНК полімераза фага Т4 має ті ж властивості, тільки 3’→5’ екзонуклеазна активність в 200 разів ефективніше. Використовується для відщіплення нуклеотидів від кінців фрагментів ДНК і для введення радіоактивної мітки у виступаючі 3’-, 5’-кінці, а також у тупі кінці.