Анкилостомидозы

Возбудители - анкилостомиды. Под этим названием объединяются два близких вида паразитических круглых червей человека из семейства Ancylostomatidae: кривоголовка, или анкилостома (Ancylostoma duodenale)- возбудитель анкилостомоза, и некатор (Necator americanus)- возбудитель некатороза. Оба вида эндемичны лишь в некоторых южных республиках СНГ: в Азербайджане и Грузии - преимущественно некатор, в Туркмении и на юге Киргизии - почти исключительно анкилостома.

Длина самок анкилостомид достигает 10-18 мм, самцов - 8-11 мм. Живые анкилостомиды розовато-желтоватого цвета. Передний, суженный конец тела заключает в себе ротовую капсулу, которая у анкилостомы вооружена кутикулярными зубцами, а у некатора - режущими пластинками. У анкилостомы передний конец слегка изогнут вентрально, а у некатора - резко загнут дорсально. Задний конец тела у самцов расширен и заключает половую сумку, или бурсу, различную по строению у анкилостомы и у некатора.

Определение вида анкилостомид производится под лупой на часовом стекле или в пробирке, а также при малом и большом увеличении микроскопа при изучении паразитов, помещенных в капли молочной кислоты под покровным стеклом. Главные из видовых признаков приводятся в табл.7.

Фекалии или дуоденальное содержимое, полученное при зондировании, исследуются с целью выявления яиц анкилостомид методом нативного мазка на большом стекле, который просматривается под бинокулярным микроскопом, а также методом флотации. При этом отстаивание продолжается всего 10 - 20 минут, т.к. позднее число яиц в пленке значительно уменьшается.

Яйца А. duodenale и N. americanus очень сходны по строению и путем микроскопии точно определить их вид редко удается. Они правильной широкоовальной формы, с тонкой бесцветной прозрачной оболочкой. Внутри видны 4-8 крупных бластомеров, не заполняющих яйцо полностью. Размеры яиц - 54-74х36-40 мкм. При обнаружении яиц в кале можно лишь сделать заключение, что найдены яйца анкилостомид.

Для выявления личинок анкилостомид используется метод Харада и Мори. На полоску фильтровальной бумаги 15х1,5 см наносится 0,5 г свежих фекалий; cвободными оставляются только концы. Полоска помещается в пробирку, заполненную на 1/4 объема водой так, чтобы один из свободных от кала ее концов был погружен в воду. Противоположный конец фиксируется резиновой пробкой. Пробирку выдерживают в термостате при температуре 26^оС 5-6 дней. Развившиеся за это время личинки опускаются в воду и оседают на дне пробирки. Они выявляются при осмотре с помощью лупы или невооруженным глазом непосредственно в пробирке при боковом освещении.

В сомнительных случаях жидкость центрифугируют и исследуют осадок под микроскопом.

Нематодозы.

Стронгилоидоз.

Возбудитель - кишечная угрица (Strongyloides stercoralis). Мелкие нитевидные гельминты, самки которых имеют размеры 2,2х0,03 мм, самцы - 0,7х0,04 мм, Паразитируют в основном в либеркюновых криптах двенадцатиперстной кишки. Самки откладывают яйца с сформированными личинками, которые вылупляются в кишечнике и выходят с калом во внешнюю среду.

Препараты для обнаружения личинок готовятся из дуоденального содержимого или из фекалий, обработанных по способу Бермана. Для этого используется специальный аппарат, состоящий из штатива и закрепленных в нем стеклянных воронок. На концы воронок надеваются резиновые трубки с зажимами. В верхней части воронки на мелкой металлической сетке (размер ячеек 1 мм), покрытой кусочком чулочного трикотажа или очень мелкого мельничного газа помещаются 20-50 г фекалий. Воронку заполняют теплой (40-50^оС) водой так, чтобы в нее была погружена нижняя часть сетки с фекалиями. В течение 4-часовой экспозиции при комнатной температуре личинки стронгилоидов мигрируют в воду и скапливаются внизу перед зажимом. Путем быстрого приоткрывания зажима немного жидкости вместе с личинками сливается в центрифужную пробирку и центрифугируется. Осадок, образующийся при центрифугировании (или отстаивании) жидкости, переносится на предметное стекло и изучается при малом и большом увеличениях микроскопа. Личинки прямые или слегка изогнутые. Длина только что вылупившейся личинки 0,2-0,3 мм, толщина - 16 мкм. Ко времени выделения из кишечника она может вырасти в 2-3 раза. На этой стадии развития личинка называется рабдитовидной. Передний конец ее тупой, задний - заостренный. Пищевод имеет два расширения. Первым из них, менее выраженным, заканчивается передняя цилиндрическая часть пищевода. Она отделяется узкой перетяжкой от находящегося дистальнее второго, грушевидного расширения (бульбус) с тремя жевательными пластинками в центре.

Нематодозы.

Трихинеллез.

Возбудитель - трихинелла (Trichinella spiralis). Длина самок - 3 - 4 мм, самцов - 1,4 - 2,1 мм, инвазионных (мышечных) личинок - 1,0-1,36 мм. Половозрелые трихинеллы живут в кишечнике хозяина, а отрождаемые самками личинки проникают в поперечнополосатые мышцы (за исключением мышц сердца), где и развиваются. Хозяевами трихинелл являются человек, свинья, крысы, очень многие виды хищных млекопитающих (медведи, волки, лисицы, собаки, кошки и др.), насекомоядные (ежи, кроты, землеройки).

Одним из наиболее точных методов паразитологической диагностики трихинеллеза является трихинеллоскопия - микроскопическое исследование с целью обнаружения личинок трихинелл. Трихинеллоскопии подвергается мясо, подозреваемое в качестве источника заражения. Если оно не сохранилось, может производиться биопсия мышц больного (трапециевидной, дельтовидной, икроножной). Срез мяса для трихинеллоскопии делается с помощью кривых ножниц. Вырезается небольшой его кусочек (7-8х1-1,5 мм) по ходу мышечных волокон и помещается на предметное стекло. С помощью двух препаровальных игл его расщепляют на пучки волокон и сдавливают сверху вторым предметным стеклом. Для удобства исследования стекла скрепляют по краям резиновыми колечками. Препарат исследуется при малом увеличении микроскопа (объектив 8-10х, окуляр 7-10х). На препарате видны длинные цилиндрические параллельно расположенные мышечные волокна, среди которых при вращении микрометрического винта микроскопа можно заметить более светлые овальные, по форме похожие на лимон трихинеллезные капсулы размерами 0,4-0,6 х 0,2-0,3 мм (рис.77). Иногда они могут иметь и нетипичную неправильную форму. Сквозь прозрачную оболочку капсулы видна личинка, спирально свернутая в два оборота. При интенсивной инвазии в некоторых капсулах может содержаться по 2 и даже 3 личинки.

Биопсию рекомендуется производить не ранее 9-11-го дня после появления симптомов болезни, т.к. лишь к этому времени в мышцах накапливается достаточно личинок, заметных в раздавленных срезах. Трихинеллоскопию применяют и для посмертной диагностики. В этом случае срезы делаются из мышц ножек диафрагмы.

Для трихинеллоскопии предпочтительнее применять специальный микроскоп - трихинеллоскоп, используемый в ветеринарных лабораториях. Он отличается тем, что дает только малые увеличения (до х70). Предметный столик его прямоугольный, приспособленный по величине для компрессория, который состоит из двух толстых пластинок, скрепленных на концах винтами. С их помощью удается получить гораздо более качественные раздавленные препараты, чем с помощью обычных предметных стекол.

При малой интенсивности зараженности мяса личинками трихин, выявить их в срезах мышц бывает затруднительно. В этих случаях при исследовании мяса, которое могло быть источником заражения, рекомендуется применять метод переваривания, при котором достигается большая концентрация личинок в препаратах. Для этого 3-5 г мяса, мелко нарезанного ножницами или пропущенного через мясорубку, помещают в натуральный или искусственный желудочный сок и оставляют в термостате при 37^о на сутки. За это время происходит переваривание его и освобождение личинок из капсул.

Переваривание измельченного трихинеллезного мяса можно производить в воронке прибора Бермана с последующим просмотром осадка (А.Ю. Березанцев). Личинки изучаются при малом и большом увеличении микроскопа (объективы 8х и 40х, окуляры 7х или 10х) в капле воды под покровным стеклом. Обычно оставленные после переваривания в желудочном соке при 37^о личинки остаются живыми и подвижными в течение суток, а отдельные экземпляры - до 3 суток. При комнатной температуре живые личинки неподвижны и спирально скручены. Поэтому такое их состояние при низких температурах свидетельствует о том, что они живы. Погибшие личинки раскручиваются, но остаются серповидно изогнутыми.

Серологические реакции становятся положительными лишь на 3-4 неделях болезни и используются главным образом для ретроспективной диагностики. Наиболее часто применяются реакция связывания комплемента, реакция кольцепреципитации и преципитации, которые проводятся, как правило, с парными сыворотками крови больного.

Нематодозы.

Филяриатозы.

К этой группе нематодозов относятся гельминтозы, вызываемые филяриями или нитчатками, принадлежащими к семейству Filariidae. Это небольшие нитевидные живородящие нематоды, паразитирующие в лимфатической системе, подкожной клетчатке и стенках полостей тела. Личинки их - микрофилярии концентрируются в поверхностных слоях кожных покровов или циркулируют в крови. Личинки одних штаммов попадают в периферическую кровь только в ночное время (периодичные), а личинки других циркулируют в крови и днем (непериодичные и субпериодичные штаммы). Развитие происходит со сменой хозяев. Промежуточные хозяева (переносчики филярий) - кровососущие двукрылые насекомые (комары, мошки, мокрецы). Филяриатозы широко распространены в тропическом и субтроическом климатическом поясе. Основные филяриатозы человека - вухерериоз, бругиоз, онхоцеркоз, мансонеллез, акантохейлонематоз и лоаоз.

· Вухерериоз

· Бругиоз

· Онхоцеркоз

· Мансонеллез

· Акантохейлонематоз (дипеталонематоз)

· Лоаоз

Нематодозы.

Филяриатозы.

Вухерериоз.

Возбудитель болезни- Wuchereria bancrofti. Размеры самок - 65-100х0,2 мм, самцов - 40х0,1мм, микрофилярий - 275-320х10 мкм. Микрофилярии окружены чехликом; передний конец их тела закруглен и снабжен стилетом. Взрослые особи паразитируют в лимфатической системе человека; личинки, живущие около 70 дней, циркулируют в кровяном русле.

Инвазия распространена в странах Азии,Африки, Америки, Австралии и на тропических островах Тихого и Атлантического океанов. Существует два штамма вухерерий: периодичный штамм, микрофилярии которого находятся в периферических сосудах лишь ночью (Microfilaria nocturna) и субпериодичный, при инвазии которым личинки паразитов циркулируют в периферической крови круглосуточно с максимумом в дневное время. Периоды появления микрофилярий в периферических сосудах приурочены к суточному ритму активности их переносчиков - комаров различных родов. Однако возможны сдвиги этой периодичности в зависимости от физиологического ритма организма хозяина. Субпериодичный штамм распространен в зоне Тихого океана (W. paciphica).

При паразитологической диагностике вухерериоза применяются методы обнаружения живых микрофилярий путем микроскопии свежей капли крови, микроскопии окрашенных мазков и толстых капель крови, а также методы накопления.

Кровь для исследования на наличие живых микрофилярий берется дважды в течение суток - днем и ночью. Забор крови из пальца или мочки уха производится по общепринятой методике. На предметном стекле при помощи деревянной или стеклянной палочки обводятся вазелином границы квадрата, соответственно размерам покровного стекла. В центр квадрата помещается небольшая капля крови и накрывается покровным стеклом; при этом кровь распределяется тонким слоем по всей его площади, а края покровного стекла, соприкасаясь с вазелином, прилипают к предметному стеклу. Препарат исследуется при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр 10х). В положительных случаях видны движения живых микрофилярий между кровяными тельцами. Видовую принадлежность их можно определить только в препаратах толстой капли крови, окрашенных краской Романовского-Гимзы, по той же методике, как и при выявлении малярийных плазмодиев.

Если в капле крови микрофилярий обнаружить не удается, применяется метод концентрации. Из вены берется 2 мл крови; она смешивается с 10 мл 1% уксусной кислоты и центрифугируется при 1500 об/мин в течение 2 мин. Поверхностный слой сливается, а осадок исследуется под микроскопом в препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

Метод фильтрации Белла. В центрифужной пробирке 1 мл крови смешивается с 9 мл изотонического раствора и 1 мл типола (детергент), или какого-либо иного синтетического моющего средства. Для ускорения гемолиза пробирка встряхивается. Смесь фильтруется под вакуумом через мембранный фильтр с диметром пор от 5,0 до 8 мкм. Осадок на фильтре заливается горячей дистиллированной водой. Затем фильтр снимается и окрашивается по Романовскому-Гимзе или гематоксилином Эрлиха, высушивается в эксикаторе, просветляется в иммерсионном масле и микроскопируется при малом увеличении под покровным стеклом.

Нематодозы.

Филяриатозы.

Бругиоз.

Возбудитель болезни- Brugia malayi. Размеры самцов - 23х0,08 мм, самок - 55х0,16 мм, микрофилярий - 240-300х7 мкм). Передний конец микрофилярий закруглен и снабжен двойным стилетом. Микрофилярии имеют чехлик. Бругиоз встречаются в странах Юго-Восточной Азии. Преобладает периодичный штамм, который вызывает антропонозную инвазию. Менее распространен субпериодичный штамм, наибольшая концентрация микрофилярий которого отмечается в ночное время. Этот штамм распространен преимущественно среди сельского населения в районах заболоченных лесов. Передача микрофилярий осуществляется различными родами комаров. Кроме человека бругиозом болеют обезьяны, кошки и собаки.

Диагностика производится также как и при вухерериозе.

Нематодозы.

Филяриатозы.

Онхоцеркоз

Возбудитель болезни - Onchocerca volvulus. Размеры самок - 350 -700х0,4 мм, самцов - 20-40х0,2 мм; микрофилярии двух размеров: 300х8 мкм и 200х6 мкм (рис.81). Паразитирует под кожей и апоневрозами мышц человека. Переносчиком служат мошки. Вокруг гельминтов развиваются соединительнотканные болезненные узлы. Микрофилярии накапливаются в толще кожи, вызывая изъязвления, проникают в органы зрения, вследствие чего возникают тяжелые расстройства зрения вплоть до слепоты. Онхоцеркоз широко распространен в странах тропического пояса Африки, встречается также в странах Центральной и Южной Америки (от южных районов Мексики до севера Бразилии). Диагноз основан на клинической картине инвазии и подтверждается при нахождении микрофилярий в срезах кожи или в глазу (с помощью офтальмоскопа).

Для получения тонкого среза складка кожи плотно сдавливается двумя пальцами. Изогнутыми ножницами срезается тонкий кусочек кожи размером 2х4 мм (с овсяное зерно) так, чтобы не возникло кровотечения. Срез можно сделать и бритвой, приподняв кусочек эпидермиса с помощью энтомологической булавки. Обычно биопробы берут в области лопатки, над тазобедренным суставом или на задней поверхности голени. Взятый кусочек помещается в каплю изотонического раствора на предметном стекле и исследуется под микроскопом. При отрицательном результате препарат дополнительно микроскопируется через 10 и 30 мин, когда микрофилярии в большем числе выходят из тканей и их движения становятся заметнее.

Нематодозы.

Филяриатозы.

Мансонеллез.

Возбудитель болезни - Мansonella ozzardi. Размеры самки - 73х0,3 мм, самца - 32 мм, микрофилярии - 173-240х4-5 мкм. Микрофилярии без чехлика. Половозрелые филярии локализуются под серозной оболочкой брюшины, в брыжжейке, в плостях тела. Переносчики - некоторые виды мокрецов. Встречается в Центральной и Южной Америке. Диагностика основывается на выявлении микрофилярий в периферической крови в любое время суток.

Нематодозы.

Филяриатозы.