Среда 199-СДС (в модификации Ю.Ф.Захаркива)

Состав среды:

- 100 мл солевого раствора: натрия хлорида 6,5 г, калия хлорида 0,14 г, кальция хлорида 0,12 г, натрия бикарбоната 0,2 г, дистиллированной воды до 1 л;

- 20 мл сыворотки крови крупного рогатого скота без консерванта (или сыворотки эмбрионов телят);

- 20 мл среды 199 для культур тканей;

- 10 мл 20 % раствора мальтозы;

- 200 мг солянокислого цистеина;

- по 0,5 мл 5% раствора пиридоксина гидрохлорида и 6% раствора тиамина бромида;

- ампициллина 125000 ЕД и гентамицина 40000 ЕД.

Указанные среды разливают в стерильные пробирки по 5 мл, заливая их слоем стерильного вазелинового масла толщиной 5 мм. Посев производят, помещая исследуемый материал при помощи пастеровской пипетки на дно этих пробирок. Урогенитальные трихомонады на 3-5-й день после посева дают придонный рост в виде плотного беловатого осадка, из которого пастеровской пипеткой берут материал для исследования в нативном мазке. При микроскопии видны одиночные трихомонады и их скопления; у отдельных их особей отмечаются активные движения жгугиков и ундулирующей мембраны. В случае отрицательных результатов исследование повторяют на 7-9-й и 11-17-й день после посева.

Среду 199-СДС (с модификациями) целесообразно также применять при оценке чувствительности трихомонад к противопротозойным препаратам методом серийных разведений в жидкой среде. Учет результатов проводится на 3 и 5 день после посева. Для получения чистых культур урогенитальных трихомонад без применения антибиотиков рекомендуются различные плотные питательные среды. На таких средах трихомонады хорошо сохраняют свои морфологические признаки.

Серологические методы. Используются как вспомогательные. Низкая иммуногенность и наличие различных серотипов урогенитальных трихомонад затрудняют получение достоверных результатов в диагностике. Серологические реакции иногда бывают отрицательными даже в случаях, когда выявлен возбудитель. Достоинством серологического метода является то, что серологические реакции остаются положительными в течение 1 года после излечения трихомониаза, что очень важно для ретроспективной диагностики. Результаты серологических реакций зависят от степени соответствия антигенной структуры штамма, вызвавшего заболевание, и штамма, использованного для приготовления диагностической сыворотки.

Для серологической диагностики урогенитального трихомониаза используются реакции агглютинации, связывания комплемента (РСК), реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), иммуноферментный анализ (ИФА) и ускоренная реакция иммунофлюоресценции (РИФ-40).

В РИФ-40 в качестве антигена используют урогенитальные трихомонады из 20-30 штаммов, выращенных на жидкой питательной среде в течение 2-3 сут. После промываний готовый антиген наносится на предметные стекла, куда добавляется инактивированная испытываемая сыворотка крови, разведенная в 40 раз бессолевым мясопептонным бульоном (рН 7), приготовленным из говяжьего мяса с повышенным содержанием (1,5%) пептона. РИФ-40 успешно применяется при диагностике бессимптомного трихомониаза, трихомонадоносительства и для определения этиологии неспецифических воспалительных заболеваний мочеполовых органов.

Микробиологический метод определения ферментативной активности трихомонад, основанный на их способности разлагать глюкозу, мальтозу, крахмал и гликоген с образованием кислоты и газа, не получил широкого распространения, поскольку ферментативная активность урогенитальных трихомонад оказалась весьма вариабельной.