Сероидентификация

Материал для исследования — отделяемое слизистой носоглотки. Методы забора материала:

1. Метод кашлевых пластинок

2. Заднеглоточный способ

3. Носоглоточный способ

Методы диагностики:

1. Бактериологический

2. Серологический

3. Экспресс-диагностика (РИФ).

Исследуемый материал: отделяемое слизистой оболочки носоглотки.

Метод кашлевых пластинок: в момент появления кашля открытую чашку Петри с питательной средой подносят ко рту больного на расстоянии 8-10 см и держат в течение 6-8 кашлевых толчков. Затем чашку закрывают и доставляют в лабораторию. Используется редко. Питательная среда: КУА плюс ant.

Носоглоточный способ: материал собирают так же, как и заднеглоточным тампоном, но его вводят через ноздрю ребенка в носоглотку.

Заднеглоточный способ: необходимо два тампона, смонтированных на алюминиевой проволоке с корковой пробкой. Стерилизуют при 1 атм. 20-30 минут. Перед взятием материала, тампон, извлекая из пробирки, сгибают под углом 120 градусов о край пробирки. В открытый рот, придерживая шпателем корень языка, ввести изогнутый сухой тампон с загнутым концом вниз до прикосновения с задней стенкой глотки. Взятый материал сразу же перенести на КУА в чашки Петри.

Затем ввести второй тампон, смоченный полужидким КУА. Забор материала как сухим тампоном. Тампон с материалом поместить обратно в пробирку и доставить в лабораторию для посева. Доставка не позднее 2-3 часов с момента забора, не охлаждая материал.

Ход исследования:

1 день:

1. Доставленные чашки с посевом поместить в термостат при 37 градусах Цельсия

2. Сделать посев на КУА в чашки Петри влажным тампоном. Поместить в термостат при 37 градусах Цельсия.

Для предохранения посевов от высыхания в термостат ставят открытый сосуд с водой.

Экспресс-диагностика:

1. Провести забор материала тампоном

2. Сделать тампоном два мазка, высушить их на воздухе, зафиксировать на пламени

3. Один мазок обработать флюоресцирующей иммунной противококлюшной сывороткой, другой паракоклюшной.

4. Препараты просмотреть в люминисцентный микроскоп меняя не менее 50 полей зрения.

5. При положительном результате видим темные клетки с четким светящимся венчиком.

2-3 день:

1. Изучение роста в стереоскоп — наличие световых конусов.

2. Пересев подозрительных колоний на чашки Петри с КУА, разделенную на сектора — посевы поставить в термостат.

3. Если подозрительных колоний будет много, из части сделать мазки, окрасить по Граму, микроскопировать.

4. При наличии Гр- мелких овоидных палочек, ставят пробную реакцию агглютинации с адсорбированной факторной сывороткой 7 для установления родой принадлежности культуры. Для установления вида ставят ОРА с факторными сыворотками 1, 14.

4 день:

1. Изучение роста чистой культуры на секторах в чашках Петри.

2. Приготовление мазков из выделенной культуры окраски по Граму.

3. Серотипирование культуры с сыворотками 7, 1, 14, ОХ 2-3 день.

4. Если B.Pertussis, то определяют серовары с моноспецифическими сыворотками:

- 1, 2, 3 — 1 серовар

- 1, 2, 0 — 2 серовар

- 1, 0, 3 — серовар

5. Для окончательной идентификации культуры ставят:

- тест на уреазу

- тест на тирозиназу

- посев на МПА

Термостатирование при 37 градусах Цельсия 24 часа.

5 день:

Учет результатов, выдача ответов.

B.Pertussis уреаза отрицательна, тирозиназа отрицательна, рост на МПА отрицателен.

B.Parapertussis уреаза положительна, тирозиназа положительна, рост на МПА положителен.

Проба на уреазу: в маленькую пробирку внести 0,3-0,4 мл 2% раствор мочевины, добавить в пробирку петлю культуры и 2-3 капли фенолфталеина. Термостатирование. Учет — при наличии у культуры фермента уреазы, который расщепляет мочевину, содержимое пробирки приобретает яркомалиновое окрашивание.

Проба с тирозином: на скошенный МПА в пробирке с 0,1% тирозином засеять выделенную культуру — поставить в термостате на 24 часа. Через 24 часа учет роста: наличие роста и окрашивание среды в коричневый цвет свидетельствует о росте возбудителей паракоклюша.

Среда КУА: готовая, черного цвета. Предохранять от высыхания. Для угнетения роста сопутствующей микрофлоры к среде в процессе приготовления добавлять пеницилин по 0,25-0,5 МЕ на 1 мл среды.

Серологический метод диагностики

РРА и РСК применяются в основном для ретроспективного подтверждения диагноза и дифференциальной диагностики атипичных форм коклюша. Агглютинины в крови больных появляются на 3-4 неделе заболевания в титрах 1:20 и выше.