Посев разведений кала на питательные среды

Первичные посевы делаются из каждого разведения параллельно на несколько питательных сред. Посевы делаются в чашки Петри с плотными питательными средами и пробирочные среды (для бифидобактерий и клостридий).

Из полученных разведений, начиная с последнего одной пипеткой на 1 мл делаются посевы по 1 капле на чашечные среды и растирают шпателем:

- анаэробный агар с канамицином, ванкомицином — для выделения бактероидов из разведений 7,8.

- анаэробный агар с колимицином и налидиксовой кислоты — для выделения пептококков, пептострептококков, вейлонелл — 5, 6.

Чашки помещают в анаэростат на 48 часов при 37 градусах Цельсия.

- среда Эндо — для выделения кишечной палочки — из разведения 2, 4.

- среда Симмонса — для выделения лактоза отрицательных условно-патогенных энтеробактерий — 2, 4, 6.

- ЖСА — для стафилококков из разведений 2, 4, 6.

- Авидовый агар для энтерококков из разведений 3, 5, 7.

- Кровяной агар — для гемолитических бактерий — 3, 5, 7

- Лактоагар МС для лактобактерий из разведений 5, 7.

- Среда Сабуро с пеницилином — для дрожжевых грибков Кандида — 2, 4, 6.

Чашки с анаэробными бактериями термостатируют при 37 градусах Цельсия в течение 24 часов (кишечные палочки, УПМ, гемолитики), 48 часов (стафилококки, лактобактерии, дрожжи), 72 часа (энтерококки).

Одновременно для получения изолированных колоний на чашечных средах делают посевы по 1 капле из разведения 4, 5, 6, 7 и распределяют каплю с помощью стеклянных бус.

Посевы на пробирочные среды для выделения бифидо и клостридий:

- среда Вильсона-Блера разливается в 3 пробирки по 9 мл (сначала по 0,5 мл тиосульфата натрия и каплю хлорида железа), добавляют по 1 мл из разведения 4, 5, 8, а затем добавляют агаровую основу Вильсона-Блера. Перемешивают и термостатируют при 37 градусах Цельсия 24 часа.

- Среда Блаурокка для выделения бифидобактерий. Пробирки со стерильной средой Блаурокка перед посевом регенерируют на водяной бане 30 минут после закипания. После чего в среду вносят по 1 мл из разведений 6, 8. Термостатируют при 37 градусах Цельсия 24 часа.

Колонии, выросшие на питательных средах при высевах из наибольших разведений идентифицируют до вида.

Количество бактерий оценивают по максимальному разведению, из которого они выросли.

Для окончательного заключения о кишечном дисбактериозе важное значение имеет повторное его выявление в динамике обследования больного.