Исследуемый материал

При парентеральных эшерихиозах: кровь, моча, ликвор, слизь из зева, гной и т. д.

При энтеральных эшерихиозах: испражнения. Оптимальное время сбора — сразу после дефекации. Сбор осуществляется из судна, с пеленки. При наличии слизи и гноя их обязательно включают в отбираемую пробу. Забор осуществляется стерильным шпателем, ложечкой в количестве 3-5 гр. Помещают в пробирку с консервантом. Для посева испльзуют последнюю вышедшую порцию. Доставка в течение 3-4 часов. Можно сохранять материал в консерванте в течение 24 часов на холоде (+5 - +6 градусов Цельсия).

К материалу прилагается направление, где указывается:

1. Какое учреждение направляет материал

2. Ф.И.О. обследуемого лица

3. Место работы обследуемого лица (для детей — название ДДУ, номер школы)

4. Дата заболевания, предполагаемый диагноз или показания к обследованию.

5. Дата и час взятия материала.

6. Фамилия и должность лица, направляющего материал.

Пробирки с материалом помещают в штативы, затем в специальные контейнеры.

Первый день. Доставленный материал в пробирке с консервантом эмульгируется стерильной стеклянной палочкой и несколько капель его наносят на поверхность Эндо, ЭМС. Стерильным шпателем делаем первичный посев таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний. Термостатирование 18-20 часов при температуре 37 градусов Цельсия.

Второй день. Изучение культуральных свойств выросшей культуры с целью обнаружения подозрительных колоний. Испытание в агглютинационном тесте на стекле части подозрительных колоний (не меньше 10) с поливалентной эшерихиозной ОК-сывороткой широкого спектра (ОКА). Части подозрительных колоний, давшие положительные ОРА и ОКА пересеваем в две пробирки: на скошенный МПА и на среду Олькеницкого для первичной идентификации. Термостатирование (МПА, Олькеницкий) 18-20 часов при 37 градусах Цельсия.

Третий день. Изучение роста на среде Олькеницкого: культуры, давшие сероводород, мочевину, вновь агглютинируют с ОКА. Для постановки ОРА используют культуру со скошенного МПА. При + ОРА эти культуры испытывают с ОК — сыворотками более узких спектров действия: ОКВ, ОКС, ОКД, ОКЕ. При положительной реакции с одной из указанных сывороток, культуру агглютинируют моновалентными ОК-сыворотками, входящими в поливалентную, давшую положительную реакцию, для ориентировочного определения ОК-группы эшерихий, т. к. исследуемая культура взаимодействует с адсорбированными моновалентными сыворотками только К-(В)-антигенами, посокольку О-антиген закрыт К-антигеном. Для окончательного подтверждения ОК-группы эшерихий, необходимо, чтобы культура вступила в реакцию с ОК-сывороткой О-антигеном. Для этого у нее необходимо разрушить К-антиген:

1. Приготовить смыв культуры со скошенного МПА, добавляя в пробирку физ.раствор.

2. Смыв культуры разлить в две пробирки.

3. Одну пробирку со смывом прогреть при температуре 100 градусов Цельсия на 30 минут, чтобы разрушить К-антиген.

4. Затем ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с моновалентными ОК-сыворотками, которые разводят до титров, указанных на пробирке.

Подготовленную сыворотку разливают в два ряда пробирок: в пробирки 1-го ряда добавляют по две капли прогретой культуры, в пробирки 2-го ряда — по две капли живой культуры. Термостатирование 2 часа — первичный учет. Окончательный учет через 18-20 часов. При положительном результате реакция должна пройти до титра или до 2/3 титра с прогретой культурой.

Культуры со среды Олькеницкого пересевают на:

1. Ряд Гисса

2. Бульон с индикаторными бумажками на индол и сероводород

3. Полу-жидкий агар по Пешкову (на подвижность)

Термостатирование 18-20 часов при температуре 37 градусов Цельсия.

Четвертый день. Учет развернутой РА для подтверждения серогруппы. Учет ферментативной активности. При наличии Н-антигена подвижная культура по Пешкову проводят типирование культуры для установления серовара. Для этого используются поливалентные сыворотки, а затем моновалентные Н-сыворотки, входящие в состав поливалентной, с которой культура прореагировала.

По эпидемиологическим показаниям при выявлении источника инфекции и путей передачи используют колициногенность (определение продуцируемых эшерихиями колицинов) и колициночувствительность (определение колициноваров). Устанавливают также фаговары. Существуют наборы типовых фагов. Чаще фаготипируются ЭПКА 3-х:

1. О111:К58

2. О55:К59

3. О26:К60

Например: фаговары для серогруппы О111: К58 — Lyon, Lille, Ysrael и т. д.