Первый день

Микроскопия исследуемого материала — окраска по Граму и по Ожешко. Наличие Гр+ спороносных (барабанных) палочек позволяет выдать ориентировочный ответ: клостридии. Исследуемый материал делят на две порции (для биопробы и бакисследования).

Часть материала засевают на среду накопления Китта-Тароцци и культивируют в анаэробных условиях при 37 градусах Цельсия в течение трех дней.

Для постановки биопробы из другой части материала экстрагируют анатоксин. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают физ.раствором для экстракции токсина на 1 час и фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат токсина делят на 2 порции.

Первая порция опытная, вторая порция контрольная — в нее добавляют противостолбнячную сыворотку и для нейтрализации токсина оставляют на 1 час. В опыт берут две пары мышей которым внутримышечно вводят: первой (опытной) паре мышей — фильтрат токсина без сыворотки, второй паре (контрольной) — фильтрат токсина с сывороткой.

Через 1-2 суток в опытной группе мышей появляются признаки столбняка: ригидность конечностей, хвоста (хвост трубой). Затем животные погибают в характерной позе: поджав передние лапки и вытянув задние. У контрольных мышей получивших антитоксическую сыворотку заболевания не возникают.

На основании положительной биопробе ставится окончательный диагноз: столбняк.

При отрицательном результате биопробы (все мыши живы) продолжают бактериологические исследования.

Со среды накопления Китта-Тароцци (2-3 сутки) делают пересевы на агар Цейсслера, культивируют в анаэробных условиях, изучают культуральные свойства (прозрачные колонии с зоной гемолиза), микроскопируют.

На 4-5 день для выделения чистой культуры пересевают на среду Китта-Тароцци и ставят биопробу с чистой культурой.

При отрицательном результате выдается отрицательный ответ.