Главная Случайная страница Контакты | Мы поможем в написании вашей работы! | ||
|
1. В 10 пробирок вносят по 1 мл раствора фермента.
2. В первые 5 пробирок (серия № 1) добавляют по 1 мл 1 % раствора NaCl, в оставшиеся (серия № 2) - по 1 мл 2 % раствора CuSO4.
3. Пробирки инкубируют в термостате при 38°С в течение 1 мин.
4. Добавление 1 мл субстрата в указанной в таблице концентрации (см. предыдущее задание) проводят попарно в каждую серию пробирок, например, через 2 мин.
5. В каждую пробирку добавляют 200 мкл раствора I2 в KI. Пробы инкубируют в течение 10 мин.
6. Проводят фотометрирование образцов при l=620 нм. Полученные результаты представляют в виде следующей таблицы:
№ пробирки | А620 | |
Серия №1 (без ингибитора) | Серия №2 (с ингибитором) | |
7. Строят график зависимости Vотн от [ S ] для первой (с NaCl) и второй (с СuSO4) серий проб. Рассчитывают KM и V max для скорости реакции расщепления крахмала в отсутствии и присутствии ингибитора, пользуясь графиком Лайнуивера-Берка.
Задание II | Определить кинетические параметры KM и V max реакции гидролитического расщепления ацетил тио холина с участием холинэстеразы и характер ингибирующего действия ацетилхолина на гидролиз ацетил тио холина под действием холинэстеразы мембран теней эритроцитов |
* Приготовление калий-фосфатного буферного раствора
2. В 100 мл стакан вносят 13,61 г КН2РО4, добавляют дистиллированной воды до отметки 70 мл и ставят на магнитную мешалку до полного растворения.
3. Доводят до значения рН 8,0 раствором гидроксида калия, а затем доводят до метки 100 мл дистиллированной водой.
* Приготовление раствора субстрата холинэстеразы (ацетилтиохолина йодида)
1. Для приготовления 0,075 М раствора растворяют 0,22 г ацетилтиохолин йодида в 10 мл дистиллированной воды. Держать на холоду!
Дата публикования: 2015-02-18; Прочитано: 252 | Нарушение авторского права страницы | Мы поможем в написании вашей работы!