Методи забезпечення ефективної експресіїї чужорідних генів

Першим етапом експресії являється процес транскрипції, при якому фермент РНК полімераза впізнає на ДНК спецефічну послідовність, що називається промотором. РНК полімераза приєдналася до ДНК розплітає дволанцюгову ДНК і починає синтезувати ланцюг. Для експресії чужорідного гена в клітині хазяїна перед ним повинен бути сильний промотор, який розпізнається РНК – полімеразою.

Другою умовою являється наявність перед геном чужерідного білка, оптимального сайта ініціації транскрипції мРНК. Чужерідний білок складається з SD сайту і ініціюючого кодона АUG і між ними повинні бути від 3 до 11 нуклеотидів.

Три способа констуювання забезпечення трансляціїї чужорідної генетичної інформаціїї в клітинах бактерій:

1. Вбудування чужорідного структурного гена, без власних регуляторних областей, в середину добре експресуючого бактеріального гена. Недолік синтезується гібридний білок, який важко виділити.

2. Створення гібридного сайту зв’язування з рибосомами.Ген вбудовують після сайта SD і він має власний ініціюючий кодон.Синтезується нормальний білок.

3. Метод гібридного оперона. Використовується принцип перекривання генів. Термінуючий кодон 1-го гену є часткою ініціюючого кодону іншого гену.

Для отримання високого виходу білка потрібно забезпечити стабільність мРНК і подавити протеоліз білків.