Лекция 3. Организация ПЦР-лаборатории и правила поведения в ней

Организация ПЦР-лаборатории предусматривает наличие 3-х изолированных друг от друга комнат:

1-ая комната – для выделения ДНК;

2-ая комната – для амплификации ДНК;

3-я комната – для детекции продуктов амплификации ДНК (электрофореза).

При этом рекомендуют комнату для электрофореза удалить как можно дальше от первых двух. Комнаты для выделения и амплификации ДНК должны быть оснащены ПЦР-боксами. Простейший бокс должен обязательно содержать ультрафиолетовую лампу, быть прозрачным и удобным для работы (рис. 3).

1 – ультрафиолетовая лампа

2 – отверстие для рук

3 – стеклянный (пластиковый) прозрачный корпус

Рис. 3. ПЦР-бокс

Обычно для создания ПЦР-бокса используется прозрачный пластик или стекло. Перед тем, как начать работу, нужно протереть внутреннюю поверхность бокса 70% этиловым спиртом. После этого включить ультрафиолетовую лампу на 30-60 минут. Ультрафиолетовые лучи обладают высокой энергией и опасны для глаз, поэтому необходимо во время стерилизации бокса ультрафиолетом покинуть помещение. Далее вымыть руки с мылом, надеть халат и приступить к работе.

В крайних случаях первую и вторую комнаты совмещают, используя при этом один ПЦР-бокс. Комнаты и оборудование для ПЦР должны содержаться в чистоте.

В ПЦР-методе используется раствор бромистого этидия. Это сильный канцероген, способный проникать через кожу. При работе с бромистым этидием нужно использовать перчатки (лучше всего из нитрильной резины) и как можно меньше прикасаться к нему. В случае попадания бромистого этидия на кожу или в глаза промыть пораженный участок водопроводной водой в течение 15 минут. В случае попадания бромистого этидия внутрь организма немедленно обратиться к доктору. Бромистый этидий используется на стадии детекции продуктов амплификации.

Все меры предосторожности и нормы поведения в лаборатории, описанные выше, направлены на то, чтобы сохранить здоровье исследователя и упредить загрязнение проб различными веществами.

В ПЦР-лаборатории строго запрещается: