Каждый студент выполняет работу индивидуально. Результаты работы демонстрирует преподавателю, производит расчеты и оформляет протокол

Оформление протокола:

1. Тема занятия.

2. Название работы.

3. Принцип метода

4. Результаты.

5. Выводы.

Результаты оформить в виде таблиц № 1 и № 2

Таблица№1	Сравнительное действие альфа-амилазы слюны и соляной кислоты на реакцию гидролиза крахмала.	Принцип:?	Выявляемые продукты	?	?	?	ВЫВОД:?
Проба с реактивом Фелинга	окрашивание	?	?	?
метод	3 мл гидрлиз-ата + 1мл реактива Фелинга, нагреть	3 мл гидролизата + 1мл реактива Фелинга, нагреть	3 мл гидролизата + 1мл реактива Фелинга, нагреть
Проба с йодом	окрашивание	?	?	?
метод	5 капель гидролизата + 1-2 капли раствора йода	5 капель гидролизата + 1-2 капли раствора йода	5 капель гидролизата + 1-2 капли раствора йода
Условия гидролиза	Водяная баня 38°С 15 минут	Водяная баня 100°С 15 минут	Водяная баня 38°С 15 минут
№ пробирки и ее содержимое	№1 1мл воды+5мл 1% раствора крахмала	№2 1мл 10% раствора HCl + 5мл 1% раствора крахмала	№3 1мл исходной слюны + 5мл 1% раствора крахмала

Таблица №2

Свойства ферментов (зависимость скорости ферментативных реакций от количества ферментов, от температуры, от активаторов и ингибиторов, специфичности ферментов)

Выявляемые продукты

ВЫВОД:?1. Исходная слюна: 2мл слюны (без пены) + 8мл дистиллированной воды – разведение 1:5 2. Разведение 1:10 2мл слюны (1:5) + 2мл дистиллированной воды – разведение 1:10 3. Разведение 1:50 1мл слюны (1:10) + 4мл дистиллированной воды – разведение 1:50 4. Разведение 1:100 1мл слюны (1:10) + 9мл дистиллированной воды – разведение 1:100

Наблюдаемое окрашивание

Дополнительные условия проведения реакций

4мл 1%раствора крахмала, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 1 капля йода в иодиде калия

условия реакции те же

условия реакции те же

10 капель 1% раствора крахмала, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 1 капля йода в иодиде калия

условия реакции те же

10 капель 1% раствора крахмала, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 1 капля йода в иодиде калия

10 капель 1% раствора крахмала, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 5 капель реактива Фелинга, нагреть до кипения

10 капель 2% раствора сахарозы, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 5 капель реактива Фелинга, нагреть до кипения

20 капель 0,5% раствора крахмала + 10 капель дистиллированной воды, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 1 капля йода в иодиде калия

20 капель 0,5% раствора крахмала + 10 капель дистиллированной воды, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 1 капля йода в иодиде калия

20 капель 0,5% раствора крахмала + 10 капель дистиллированной воды, экспозиция 10 минут при комнатной температуре + 1 капля йода в иодиде калия

Материал исследования

Слюна, разведенная 1:10 – 1мл

Слюна, разведенная 1:50 – 1мл

Слюна, разведенная 1:100 – 1мл

Кипяченая исходная слюна

Исходная слюна – 5 капель

Исходная слюна – 5 капель

Исходная слюна – 5 капель

Исходная слюна – 5 капель

Исходная слюна – 5 капель

Исходная слюна – 5 капель

Исходная слюна – 5 капель

Итоговый контроль.

Контроль усвоения материала занятия проводится в форме индивидуальной беседы в процессе проверки протокола. Для проведения контроля используются следующие вопросы:

1. Каким образом можно измерить активность a-амилазы?

2. Каким образом выявляются продукты расщепления крахмала?

3. Как можно определить стадию расщепления крахмала?

4. Покажите работу по изучению зависимости скорости ферментативной реакции от количества ферментов. Объясните полученные результаты.

5. Покажите работу по изучению специфичности действия a-амилазы. Объясните полученные результаты.

6. Покажите работу по изучению действия активаторов и ингибиторов амилазы. Объясните полученные результаты.

7. Как зависит активность фермента от температуры? Как вы это доказали?

8. Как зависит активность фермента от его количества? Как вы это доказали?

9. Какое вещество является активатором a-амилазы? Ингибитором? Как Вы это доказали?

10. В каком случае расщепление крахмала идет более интенсивно: под влиянием НСl или a-амилазы? Как Вы это доказали?

11. Является ли сахароза субстратом a-амилазы? Как Вы это доказали?

12. Какие ферменты находятся в слюне? Какие вещества являются их субстратами?

13. Какая реакция используется для обнаружения глюкозы?

14. Какие продукты выявляет проба с йодом?

15. На какое соединение проводится проба Фелинга? Как она выполняется

Работа студента на занятии оценивается по результатам письменной контрольной работы, по активности на занятии, правильности выполнения лабораторного практикума, правильного оформления протокола и сделанных выводов, а также правильных ответов на вопросы итогового контроля.

Оценка по контрольной работе выставляется в журнале, а оценка практической части занятия проводится путем выставления зачета в рабочей тетради и кафедральном журнале.

Занятие № 4 (трехчасовое).

Тема: Механизм действия ферментов Классификация и номенклатура ферментов. Количественное определение активности альфа-амилазы в сыворотке крови унифицированным методом.

Самоподготовка к занятию.

Цель самоподготовки.

Знать:

а) механизм действия ферментов;

б) номенклатуру и классификацию ферментов;

в) характеристику отдельных классов ферментов.

Уметь:

а) использовать ФЭК для определения оптической плотности исследуемых растворов;

б) пользоваться мерными пипетками.

План работы.

1. Прочитать лекционный материал по темам: «Понятие о ферментах как биологических катализаторах. Структурная организация и функции ферментов. Ферменты – протеиды. Витамины и их коферментная функция», «Ферменты – протеины. Понятие об активном, субстратном и аллостерическом центрах ферментов. Механизм действия ферментов и регуляция их активности.», «Свойства ферментов. Классификация и номенклатура ферментов. Использование витаминов и ферментов в фармации. Энзимодиагностика и энзимотерапия».

2. Прочитать по учебнику раздел «Ферменты».

3. Прочитать лабораторную работу «Определение активности a-амилазы в сыворотке крови» () Строев Е.А., Макарова В.Г. Практикум по биологической химии, 1986. – С. 180-181.

4. Ответить на вопросы для самоконтроля (см. список основной литературы №4).