Лабораторная диагностика. В эндемичной местности предварительный диагноз африканского трипаносомоза с большой степенью вероятности можно поставить на основании клинических симптомов

В эндемичной местности предварительный диагноз африканского трипаносомоза с большой степенью вероятности можно поставить на основании клинических симптомов. Однако неопровержимым доказательством его служит обнаружение T.gambiense или T. rhodesiense при лабораторных исследованиях. В зависимости от стадии и формы болезни для их выявления изучаются препараты крови, пунктата лимфатических узлов, спинномозговой жидкости и экссудатов из полостей тела.

В нативных препаратах крови или пунктатах лимфатических узлов, которые просматриваются под сильным "сухим" объективом при опущенном конденсоре, в темном поле или с фазово-контрастными устройством, первым признаком наличия трипаносом служит пассивное перемещение эритроцитов или других клеток, вызванное их энергичными движениями. В этих местах препарата можно заметить и самих паразитов, которые имеют вид светлых, удлиненных, волнообразно изгибающихся микроорганизмов.

В препаратах крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе, в первый период паразитемии можно обнаружить наиболее типичные тонкие трипомастиготные формы трипаносом длиной 15-40 мкм и шириной 2-4 мкм /рис.7,г/. Цитоплазма их имеет голубой цвет. Ядро, расположенное примерно посередине клетки, окрашивается в рубиново-красный цвет, также как и лежащие позади него кинетопласт и базальное тельце, от которого начинается жгутик. Он выходит из задней части клетки и волнообразно тянется вдоль нее вперед. Жгутик соединен с поверхностью клетки ундулирующей мембраной. Впереди клетки видна длинная свободная часть жгутика. В плазме крови или в тканевой жидкости трипаносомы двигаются при помощи колебаний жгутика и мембраны, а также посредством изгибаний тела (рис.8,а). Через некоторое время в крови появляются и более короткие (11-27 мкм) и широкие формы трипаносом с тупо закругленным задним концом и почти полным отсутствием свободной части жгутика.

При исследовании крови и пунктата лимфатических узлов обычно готовятся препараты "толстая капля". Для установления стадий развития или особенностей морфологии паразитов используется "тонкий мазок". Вследствие непостоянства уровня паразитемии исследования крови нередко приходится повторять неоднократно, а также прибегать к методам концентрации. Особенно часто они применяются при поисках T. gambiense, содержание которых в крови, как правило, бывает незначительным.

Один из методов концентрации трипаносом заключается в тройном центрифугировании цитратной крови с последующим просмотром осадка. Для этого шприцем, содержащим 1 мл 6% раствора цитрата натрия, берут из вены 10 мл крови. Хорошо перемешивают и центрифугируют 10 минут при 1500 оборотов/мин. Лежащий над осадком эритроцитов слой, содержащий лейкоциты, отсасывают с помощью пипетки и вновь центрифугируют. Осадок этого центрифугата содержит лишь единичные эритроциты и много лейкоцитов. Надосадочный слой сыворотки вновь отсасывают и центрифугируют не менее 15 минут при 2000 оборотов/мин. Из осадка, содержащего лишь небольшое количество клеток крови, сразу же готовят и просматривают нативные препараты, а затем препараты, окрашенные по Романовскому-Гимзе. В положительных случаях в них обнаруживают трипаносом.

В терминальной стадии болезни исследуют спинномозговую жидкость, полученную путем люмбальной пункции. Ее производят лишь при уверенности, что в крови трипаносомы отсутствуют, иначе можно спровоцировать проникновение их в ЦНС. Полученный ликвор центрифугируют в течение 10 минут при 1000 оборотов/мин. При наличии в нем трипаносом подвижные их формы выявляются в нативных мазках из осадка. Просматривают также препараты, окрашенные по Романовскому-Гимзе.

Для серологической диагностики наиболее часто применяется реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). При массовых обследованиях в полевых условиях используется метод прямой агглютинации на предметном стекле.

В диагностике имеют значение также неспецифические реакции (в том числе формоловая проба), а также методы определения содержания клеточных элементов и белка в спинномозговой жидкости, уровня Ig M в сыворотке и ликворе.

Для выделения штаммов T. rhodesiense мелким лабораторным животным (мышам, крысам, золотистым хомячкам и др.) вводят кровь, ликвор или пунктат лимфатических узлов больных в количестве 0,5 мл внутрибрюшинно. К T. gambiense наиболее чувствительны мартышки родов Cercopithecus и Erithrocebus.

Трипаносом можно культивировать на питательных средах Вейнмана (Weinman), Рейхенау (Reichenow) и др. Для приготовления этих сред используются эритроциты и цитратная плазма крови человека, раствор Рингера, мясной экстракт, пептон и другие компоненты.