Определение группы крови

I. Определение группы крови с помощью стандартных сывороток

Исследование проводят в помещении с хорошим освещением и температурой воздуха 15-25°С. Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее оснащение:

1. Два комплекта стандартных сывороток I (О), II (А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV (АВ) группы. В каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку.

2. Флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой.

3. Чистая сухая тарелка.

4. Предметные стекла.

5. Стерильные скарификаторы для прокола пальца.

6. Стерильные ватные шарики.

7. 70° этиловый спирт.

Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой маркировкой: I (О) - бесцветная, II (А) - голубая, III (В) – красная, IV (АВ) – желтая. Соответствующая цветовая маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки I (О) полос нет, сыворотки II (А) - две полосы синего цвета, сыворотки III (В) - три полосы красного цвета и сыворотки IV (АВ) – четыре полосы желтого цвета. Сыворотки хранятся при температуре +4 - +10 °С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнение являются признаками непригодности сыворотки. Сыворотки с просроченными сроками хранения к использованию не пригодны.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I (О), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I (О), II (А), III (В) групп. Подушечку пальца пациента обрабатывают 70° этиловым спиртом и делают прокол кожи стерильным скарификатором. Первую каплю крови снимают ватным шариком, последующие разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 минуты, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 минут проводят окончательную оценку реакции агглютинации.

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен.

Возможны следующие 4 комбинации реакций агллютинации со стандартными сыворотками I (О), II (А), III (В) групп:

1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агллютинации. Исследуемая кровь I (О) группы.

2. Реакция изогемагллютинации отрицательная с сывороткой II (А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I (О) и III (В) групп. Исследуемая кровь II (А) группы.

3. Реакция изогемагллютинации отрицательная с сывороткой III (В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I (О) и II (А) групп. Исследуемая кровь III (В) группы.

4. Сыворотки I (О), II (А), III (В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит IV (АВ) группе. Прежде чем дать окончательное заключение необходимо провести реакцию изогемагллютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагллютинации позволяет отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе.

Выявление других комбинаций свидетельствует о неправильном определении групповой принадлежности крови больного. Во всех сомнительных случаях необходимо произвести повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стандартных эритроцитов. Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследование, с указанием даты исследования.

II. Определение группы крови по стандартным эритроцитам

Из вены больного ребенка берут 3-4 мл крови в пробирку и центрифугируют. Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I (О), II (А), III (В). В каждый квадрат тарелки наносят по капле сыворотки больного, к которой добавляют каплю стандартных эритроцитов, в 5 раз меньшую капли исследуемой сыворотки. Перемешивают капли углом предметного стекла, покачивают тарелку в течение 3 минут, затем добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия, продолжают смешивать покачиванием и через 5 минут оценивают результаты.

Возможны 4 варианта реакции агглютинации:

1. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (О) группы и определяется с эритроцитами II (А) и III (В) групп – исследуемая кровь I (О) группы.

2. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (О) и II (А) групп и определяется с эритроцитами III (В) группы – исследуемая кровь II (А) группы.

3. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (О) и III (В) групп и определяется с эритроцитами II (А) группы – исследуемая кровь III (В) группы.

4. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I (О), II (А), III (В) групп – исследуемая кровь IV (АВ) группы.

III. Определение группы крови с помощью стандартных цоликлонов анти-А и анти-В

На тарелку наносят одну каплю цоликлона анти-А и одну каплю цоликлона анти-В, в каждую каплю цоликлона помещают по капле крови пациента, перемешивают и оценивают реакцию:

1. Отсутствие агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В - исследуемая кровь I (О) группы.

2. Наличие агглютинации только с цоликлоном анти-А - исследуемая кровь II (А) группы.

3. Наличие агглютинации только с цоликлоном анти-В - исследуемая кровь III (В) группы.

4. Наличие агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В - исследуемая кровь IV (АВ) группы.