Титрационный метод

Среда для первичного посева — Кесслера. Состав: 10 грамм пептона, 50 мл бычьей желчи, 10 грамм лактозы, 4 мл генцианфиолета и вода до 1 литра. Генцианфиолет подавляет рост сопуствующей Гр+ микрофлоры. Стерилизуют при 0,5 атм. 15 минут.

Разлив среды для работы: один флакон с 50 мл среды и ряд пробирок с 9 мл среды. Для улавливания газа в среде используются поплавки (стеклянные трубочки с запаянным одним концом).

Посев разведений почвы:

1 день:

1. Во флакон внести 10 мл из разведения 1/10, т. е. 1 грамм почвы.

2. В пробирки внести последовательно по 1 мл из всех разведений, начиная с 1/10.

3. Термостатируем 24 часа при 37 градусах Цельсия.

2 день:

1. При отсутствии роста посевы оставляем в термостате еще на 24 часа.

2. При помутнении среды и газообразования (забродившие пробы) делаем высев петлей на Эндо по секторам, которые со стороны дня маркируется: 0,1 грамм, 0,01 грамм и т. д. с учетом какие разведения забродили. Чашки термостатируем 24 часа.

3 день:

1. Изучение культуральных свойств: БГКП дают ярко-малиновые колонии.

2. Окраска по Граму ярко-малиновых колоний. БГКП — Гр-.

3. Постановка оксидазной пробы — на колонию наносим каплю реактива на оксидазу, наблюдаем 2-5 минут. Если колонии не посинели, остались ярко-малиновые, значит, выросли БГКП (ОП-).

4. Пересев ярко-малиновых колоний на ГПС (глюкозопептонную среду).

4 день:

1. На ГПС — кислота и газ.

Ответ выдается в титре БГКП. Титр-БГКП — это наибольшее разведение почвы, в котором установлено наличие БГКП. Например, титр БГКП — 0,001 грамм.

Воздух