Схема микробиологического исследования на сифилис

Обнаружение трепонем в исследуемом материале (шанкр, лимфоузлы, сыпь). Микроскопия препарата «раздавленная капля» в темном поле.

Обнаружение антител, серодиагностика (RW, РМП, РИТ, РИФ).

Материал для исследования зависит от периода болезни.

Первичный период — содержимое шанкра и пунктат лимфатических узлов. Вторичный период — отделяемое слизистых и соскоб кожной сыпи. Из этих материалов готовят нативные препараты и микроскопируют в темном поле при объективе 40.

При положительном результате видны спиралевидные нити с равномерными мелкими завитками, совершающие маятникообразные и поступательно-сгибательные движения.

При развитии поражения слизистой рта при вторичном сифилисе или при локализации твердого шанкра в полости рта приходится дифференцировать бледную трепонему от сапрофитных трепонем, являющихся нормальными обитателями ротовой полости. В этом случае диагностическое значение имеет обнаружение бледной трепонемы в пунктате лимфатических узлов (микроскопия).

Кровь берут для серодиагностики во вторичный и третичный периоды. Ликвор берут для серодиагностики в третичный и четвертичный периоды. Серодиагностика — основной метод диагностики сифилиса, включающий в себя комплекс серологических реакций — РСК (реакция Вассермана), реакция микропреципитации, РИФ (реакция иммунофлуоресценции), РИТ (реакция иммобилизации трепонем).

Реакции Вассермана и микропреципитации широко используют при обследовании больных и здоровых лиц.

РИФ и РИТ проводят в специализированных учреждениях для уточнения диагноза.

RW — реакция Вассермана (РСК).

Материал — кровь больного для выявления соответствующих антител. Компоненты: инактивированная сыворотка больного, диагностикумы, комплемент, гемолитическая система.

Исследуемую сыворотку (сыворотку больного) инактивируют для разрушения комплемента больного (нагревают на водяной бане при 56 градусах Цельсия 30 минут) и разводят 1:5.

РСК ставят одновременно с двумя антигенами-диагностикумами:

1 — специфический АГ (разрушенные ультразвуком трепонемы сифилиса)

2 — неспецифический АГ (кардиолипидный АГ — экстракт из бычьего сердца)

К каждой пробирке добавляют комплемент, термостатируют при 37 градусах Цельсия 1 час для образования комплекса АГ+АТ+К. Для выявления образовавшегося комплекса добавляют гемолитическую систему (гемолитическая сыворотка + эритроциты барана). Все компоненты берут в равных объемах (0,5 мл).

При положительной реакции наблюдается задержка гемолиза (осадок эритроцитов в виде пуговки). При отрицательной — гемолиз эритроцитов — лаковая кровь. Интенсивность RW оценивается в крестах.

Ответ:

1. RW ++++ резко положительная (пуговка)

2. RW +++ положительная (пуговка с элементами гемолиза 25%)

3. RW ++ слабоположительная (небольшая пуговка с гемолизом 50%)

4. RW + сомнительная (75% гемолиза)

5. RW — отрицательная (полный гемолиз, лаковая кровь).

Первичный период характеризуется отрицательный отрицательной RW. Реакция Вассермана становится положительной после 2-3 недель после появления твердого шанкра и остается положительной во втором и третьем периоде сифилиса. Для диагностики 4 периода помимо крови исследуют ликвор на RW вместо сыворотки. После курса лечения реакция Вассермана становится отрицательной.

Реакция микропреципитации

Параллельно с реакцией Вассермана ставят реакцию микропреципитации: на предметное стекло наносят три капли сыворотки больного и добавляют неспецифический кардиолипидный АГ. При положительной реакции образуются хлопья.

РИТ — реакция иммобилизации трепонем — потеря подвижности бледной трепонемы (иммобилизация) под действием антител сывороти больного в присутствии комплемента.

Компоненты: инактивированная сыворотка больного, диагностикум — живые тканевые трепонемы, комплемент.

Учет — приготовление нативных препаратов и микроскопия в темном поле — определяют количество подвижных и неподвижных трепонем. Результат считается положительным при иммобилизации более 50%.

РИФ — реакция иммунофлуоресценции — желто-зеленое свечение тканевых трепонем в люминесцентном микроскопе в результате образования светящегося комплекса с антителами сыворотки больного.