Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Используется для выявления и идентификации специфических антигенов в любом биоматериале (крови, кале, мокроте, моче и т. д.).

Оборудование: люминесцентный микроскоп, предметные стекла (1,2-1,4 мм), покровные стекла (0,17 мм), влажная камера, люминесцирующая сыворотка, физ. раствор, раствор глицерина (ЧДА, pH 7,4), маркер, лотки.

Алгоритм:

1. Взять чистое, обезжиренное стекло

2. Обвести маркером контур будущего мазка, подписать

3. Приготовить мазок из поступившего биоматериала

4. Зафиксировать химическим способом

5. Поместить мазок во влажную камеру на 30-60 минут

6. На мазок нанести каплю люминесцирующей сыворотки, родственной к искомому антигену

7. Закрыть крышкой, поместить в термостат на 20-30 минут

8. Промыть физ. раствором, высушить, нанести каплю глицерина

9. Покрыть покровным стеклом

10. Рассмотреть в люминесцентный микроскоп

Если в препарате есть антигены, родственные антителам люминесцирующей сыворотке, образуется комплекс АГ+АТ+люминофор, ярко-светящийся на темном фоне. Этот метод называют прямой реакцией РИФ.

Люминофоры: флюоресцеин (зеленое свечение), родамин (красное свечение) и т. д.

Неудобство прямой РИФ: необходимо иметь люминесцирующие сыворотки к каждому определенному антигену. Эти сыворотки сложны в изготовлении.