Характеристика компонентов

1. Исследуемая сыворотка. Перед работой инактивируется при 56 градусах 30 минут. Разводится физ. раствором 1:5.

2. Антигены изготавливаются из взвеси убитых микроорганизмов, их лизатов, полных антигенов, экстрактов тканевых липидов и т. д. Антигены могут обладать антикомплиментарным действием. Поэтому в опыте необходимо применять в оптимальном количестве: в рабочей дозе. Для расчета ее необходимо комплемент оттитровать: для этого из основного разведения его (500 млн. или 1 млрд. микробных тел в 1 мл физ. раствора) готовят ряд последовательных разведений. Для этого в ряд пробирок несколько последовательно уменьшающихся доз основного разведения: от 0,5 до 0,05, доливая по 1 мл физ. раствором. Титром антигена считается его наименьшая доза при которой прекращается задержка гемолиза и следовательно, отсутствует его комплементарное действие. Рабочая доза антигена составляет 1/2-2/3 ее титра.

3. Комплемент — смесь сывороток 3-5 морских свинок, или сухой в ампулах. Перед работой смесь сывороток разводят 1:10 физ. раствором, сухой — по инструкции. Определяют титр комплемента, т. е. минимальное количество его, в присутствии которого 0,5 мл гемолитической сыворотки лизирует 0,5 мл 3% взвеси эритроцитов барана в течение 30 мнут при температуре 37 градусов. При постановке РСК пользуются не титром, а рабочей дозой комплемента, представляющей собой титр комплемента, увеличенный на 20-30%.

4. Гемолитическая сыворотка — полученная на производстве, в ответ на парентеральное введение животному эритроцитов другого вида животного. У первого животного вырабатывается на эритроциты антитела — гемолизины, а соответственно сыворотка называется гемолитической. При воздействии гемолитической сыворотки на соответствующие эритроциты и при участи комплемента происходит гемолиз эритроцитов, т. к. нарушается связь гемоглобина со стромой эритроцитов и выхождением его в окружающую среду. Гемолизины обладают строгой специфичностью: лизируют только тот вид эритроцитов, на иммунизацию которыми они выработались. Например, при иммунизации бараньими эритроцитами, выработанные гемолизины будут лизировать эритроциты барана. Чаще в лаборатории поставляют сыворотку кролика, иммунизинованную эритроцитами барана. На этикетке каждой ампулы указан титр сыворотки, т. е. ее максимальное разведение при котором наблюдается полный гемолиз эритроцитов барана в присутствии комплемента, после выдерживают пробирки в течение 1 часа при 37 градусах.

5. 3% взвесь эритроцитов барана.

6. Гемолитическая система — состоит из равных объемов гемолитической сыворотки и 3% взвеси эритроцитов барана. На одну реакцию берут 0,5 мл гемолитической сыворотки 0,5 мл 3% взвеси эритроцитов барана. Перед работой гемолитическую систему выдерживают в термостате 30 минут для повышения ее чувствительностью.