Алгоритмы постановки развернутой реакции агглютинации

1. В отдельную пробирку готовят отдельное разведение исследуемой сыворотки 1:50 (0,1 мл сыворотки + 4,9). На пробирке указывают степень ее разведения.

2. В штатив набрать ряд рабочих пробирок (обычно 5 пробирок), которые называются агглютинационными.

3. Во все пробирки внести по 1мл физ. раствора.

4. Из разведения 1:50 1мл внести в первую пробирку штатива, получилось разведение 1:100

5. Из разведения 1:100 другой пипеткой перенести 1мл во вторую пробирку штатива.

6. Затем вторую перенести в третью, из третьей перенести в четвертую, из четвертой в пятую. Из пятой пробирки 1 мл перенести в дез. раствор. Таким образом получается разведение: 1/100, 1/200, 1/400, 1/800 1/1600 и общей объем в каждой пробирке 1мл.

7. Реакция сопровождается постановкой двух контролей: контроль сыворотки (кС) — 1 мл сыворотки в разведении 1/50 и контроль антигена (кА) — 1 мл физ. раствора + 2 капли диагностикума.

8. В 5 пробирок внести по 2 капли диагностикума. В пробирках должна появится равномерная муть.

9. Пробирки встряхивают и ставят в термостат при 37 градусах на два часа, после чего проводится предварительный учет реакции окончательный через 18-20 часов, выдерживая пробирки при комнатной температуре.

Учет начинается с контролей.

1. кС — должен быть прозрачный

2. кА — равномерно мутный

После этого просматривают рабочие пробирки в проходящем свете (на темном фоне) невооруженным глазом, с помощью лупы или агглютиноскопа.

При положительной реакции в пробирках видны зерна или хлопья агглютината. Агглютинат постепенно оседает на дно в виде «зонтика», а жидкость над осадком просветляется. Различают мелкозернистую и хлопьевидную агглютинацию. Мелкозернистую дают склеенные неподвижные формы бактерий, а хлопьевидную — подвижные. Интенсивность реакции выражается в крестах:

1. ++++ все клетки осели на дно пробирки, надосадочная жидкость прозрачная. Реакция резко положительная.

2. +++ осадок меньше, нет полного просветления надосадочной жидкости.

3. ++ осадок еще меньше, надосадочная жидкость мутная

4. + незначительный осадок, жидкость мутная, реакция сомнительная

5. - осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле АГ. Реакция отрицательная.