Диагностика. Стандартизация методов взятия, транспортировки и определения микроорганизмов очень важна, как и в случае других исследований

Стандартизация методов взятия, транспортировки и определения микроорганизмов очень важна, как и в случае других исследований. Здесь играет роль выбор лаборатории, это позволяет сравнивать разные случаи и смотреть их в динамике. Международные стандарты пока разработаны только для лабораторного микробиологического анализа сельскохозяйственных животных (Office International des Epizooties. Manyal of standards for diagnostic tests and vaccines, 3-d ed Paeis, Office International des Epizooties, 1996).

Материал для бактериальных исследований может быть взят в виде мазков, соскобов, аспиратов, биоптатов или крови. Любой из них может быть использован для обнаружения аэробов, анаэробов и внутриклеточных организмов (таких как хламидии и микоплазмы), а также грибов и вирусов. Рептилии не должны получать перед этим антибиотиков, материал не должен быть загрязнен.

Аэробы.

Брать материал необходимо стерильным тампоном и использовать транспортную среду Стьюарта, на которой материал сначала инкубируют 30 минут или отправляют в лабораторию при 4 ^оС на хладоагенте или льду. Для проведения полевых исследований Jacobson (1992) рекомендует транспортные среды с трипсиновым солевым бульоном, которые после инокуляции необходимо заморозить в жидком азоте и затем транспортировать в лабораторию на сухом льду. Для быстрой транспортировки (в течение 72 часов) вполне пригодны универсальные транспортные среды, такие как тампон со средой Кэри Блейр или угольный тампон Эймса.

Аспираты нужно культивировать незамедлительно или отправлять прямо в шприце на обычном или сухом льду. Образцы крови должны быть инокулированы возможно скорее (предпочтительно в течение часа) на специальные жидкие среды.

Анаэробы.

Техника взятия проб такая же, но лучше использовать специальные транспортные среды и пакующие системы, которые также пригодны для транспортировки микроаэрофильных или СО₂-зависимых микроорганизмов.

Хламидии.

Лучше использовать специальные транспортные среды, которые выпускают для работы с кошками или птицами, и транспортировать их на льду.

Микоплазмы.

Их роль в патогенезе инфекций у рептилий стала выясняться лишь в последние годы и техника взятия, транспортировки и культивирования еще находятся в стадии разработки (Jacobson et al., 1992). Авторы рекомендуют специальную обогащенную среду SP4, которая может быть приготовлена в виде бульона, агара и для транспортных сред.

Специальные условия культивирования.

Среды для культивирования подбираются с учетом поставленной задачи. Если необходимо диагностически исключить конкретный патоген (например, сальмонелл), это следует указать в сопроводительном документе. Для культивирования конкретных патогенов могут быть подобраны более специфичные среды. Аэробов обычно культивируют на кровяном агаре, МакКонки/дезоксихолатном агаре или селенит F-бульоне. Для микобактерий обычно применяют среду Левенштейна-Иенсена.

Очень удобным и популярным в последние годы стало использование стандартных плат для биохимической идентификации микроорганизмов. Поскольку они занимают немного места и хранятся долгое время, их удобно использовать как в лаборатории, так и в полевых условиях. Например, стандартные платы BBL Crystal Enteric / Non Fermenter ID Kit (Becton Dickinson) позволяют определить таких обычных для рептилий патогенов, как Aeromonas, Pseudomonas, Salmonella arizonae, E. coli и т.д.

Биоптаты в начале измельчают, материал, необходимый для гистологических исследований, отбирают заранее. Материал для культивирования грибов измельчают с добавлением антибиотика (гентамицин или амикацин).

До сих пор продолжаются дебаты о температуре, необходимой для культивирования изолятов от рептилий: при 37 ^оС или более низких температурах, вплоть до 24 ^оС, рекомендуемых Needham (1981), или в обоих режимах. Мы всегда инкубируем при 37 ^оС, кроме некоторых случаев, когда рептилия является холодолюбивой (гаттерия, некоторые виды змей). В этом случае инкубацию проводят в 2-х режимах, причем инкубация при 24 ^оС обычно занимает не менее 5 дней. Об инкубации микобактерий см. в соответствующем разделе.