Номенклатура

В 1980 Всесвітня Організація Охорони (ВОЗ) здоров'я переглянула систему номенклатури. Вона включає низку істотних параметрів: 1) тип вірусу; 2) природний господар, якщо це не людина; 3) географічне походження, 4) номер лабораторного штаму 5) рік виділення, 6) для вірусу типу а потім слідує в круглих дужках антигенний опис гемагглютинина і нейраминидазы. Наприклад, вірус грипу А: Хабаровськ / 90 / 77 (Н1N1).

Є 13 різних Н антигенів і десять N антигенів. Тільки Н1-Н3 і N1-N2 були поки виявлені у вірусів людини, інші виділяються від тварин і птахів.

Антигенна структура: антигени вірусу грипу можуть класифікуватися на внутрішні і поверхневі антигени, внутрішній антиген – рибонуклеопотеид і, отже, називається РНП–антиген. Оскільки він виявляється у вільному вигляді в інфікованих тканинах і в надосадочной рідині після центрифугирования вируссодержащей рідини, він також називався розчинним (англ. soluble) S-антигеном. S-антиген може виявлятися реакцією скріплення комплементу і реакцією иммунопреципитации, він є типоспецифическим, і залежно від S-антигена віруси грипу класифікуються на типи А, В і З. Рібонуклеопротєїдниє антигени типів А, В і З розрізняються, але всі штами кожного типу володіють однаковим антигеном. S-антиген стабільний і не виявляє істотної антигенної мінливості. Антитіла до цього антигена утворюються під час інфекції, але не завжди у осіб, імунізованих вбитими вакцинами.

Термін є «вірусним», «вариабельный» або V-антиген використовувався раніше для позначення поверхневого антигена вірусу грипу. Антитіла до V-антигена визначаються в реакції скріплення комплементу. V антиген фактично полягає, принаймні, з двох кодованих вірусом білків, гемагглютинина і нейраминидазы, ці два білки було виділено і обчищені.

Гемагглютінін - гликопротеид, складений з трьох мономерів. Він ответствен за гемагглютинацию і гемадсорбцию і забезпечує адсорбцію вірусу як на мукопротеиновых рецепторах еритроцитів, так і на клітках респіраторного епітелію. Антітела-антігемагглютініни утворюються після інфекції і імунізації. Це - захисні антитіла, предотвращающие адсорбцію вірусу до кліток. Гемагглютінін - штаммоспецифический антиген і здібний до значної варіації. До справжнього часу ідентифіковано 13 різних підтипів гемагглютинина у вірусів грипу, інфікуючих людину, тварин і птахів (їх називають Н1 - Н13).

Нейрамінідаза – гликопротеиновый фермент, який руйнує рецептори клітки в результаті гідролізу. Вона полягає з чотирьох мономерів. Антитіла до нейраминидазе утворюються після інфекції і імунізації. Вони не так ефективні, як антигемагглютинины. Вони не предотвращают адсорбцію вірусу на клітках, але можуть пригнічувати вихід вірусного потомства і, може таким чином вносити внесок в обмеження інфекції. Нейрамінідаза - штаммоспецифический антиген виявляє мінливість. Поки ідентифіковано десять різних підтипів нейраминидазы (N1- N10).

Вірус грипу володіє загальними антигенами з изоантигеном А еритроцитів людини, що і обумовлює нездатність деяких людей продукувати супроти його антитіла.

Культивування. Віруси грипу добре розмножуються в амниотической і аллантоисной оболонках курячих ембріонів, первинно трипсинизированных культурах бруньк мавп, ембріона людини і ін.

Резистентність. При кімнатній температурі вірус грипу инактивируется через декілька годин, від нагрівання до 65 ‘З гине протягом 5- 10 мін. Дуже чутливий до висушування, швидко руйнується в кислій, а також лужному середовищу, легко знешкоджується під впливом ефіру, дезоксихолата натрія, а також всіма дезинфікуючими речовинами: хлорним вапном, хлораміном, формаліном і ін. Згубна дія надають на вірус грипу ультрафіолетове проміння і ультразвук.

Патогенність для тварин. Свині, коні, і деякі птахи природно сприйнятливі до деяких типів вірусу грипу. Віруси типу А і В легко пристосовуються до багатьох видів домашніх тварин під час епідемій, але їхнє епідеміологічне значення для людини недостатньо вивчено. З експериментальних тварин найсприйнятливішими виявилися африканські тхори. Після зараження у них через 2 дня підвищується температура, розвиваються катары верхніх дихальних колій, наголошуються виділення з носа секрету гнійного характеру, чхання. Миші і молоді свині також сприйнятливі до грипу.

Патогенез захворювання у людини. Вхідні ворота – респіраторний тракт. При експериментальній інфекції у добровольців дуже малі дози (приблизно три життєздатної частинки) можуть викликати інфекцію, якщо попадають аерозольний. Бульшие дози є потрібними при зараженні интраназально. Вірусна нейраминидаза полегшує інфекцію, зменшуючи в'язкість плівки слизу, вистилаючого респіраторний тракт і звільняє рецептори поверхні клітки для адсорбції вірусу. мерцательные клітки дихальних колій - головні місця вірусної інфекції. Ці клітки ушкоджуються і віддаляються, залишаючи оголеними базальні клітки в трахеї і бронхах. Це робить респіраторний тракт високо уразливим до бактерійної інвазії.

Вірус грипу - строго пневмотропен і розмножується тільки в клітках епітелію дихальних колій. Оскільки вірус розмножується і розвивається інфекція, поступово залучаються до процесу бронхи, бронхіоли, і альвеолярні эпителиоциты. Пошкоджений мерцательный епітелій втрачає свої вії, в результаті цього позбавляється своїй захисній функції. Це створює сприятливе середовище для проникнення повторної бактерійної флори (стрептококів, стафілококів, Н. influenzae, микоплазм і ін.) які викликають ускладнення (бронхіт, пневмонію, плеврит, енцефаліт, грипозний менінгіт). Крім того, грип активізує хронічні захворювання (туберкульоз) і значно знижує імунітет до багатьох інфекцій.

Вірусна пневмонія, що відзначається тільки в більш важких випадках, пов'язана з гіперемією і ущільненням альвеолярних стін, всерединітканинною інфільтрацією лейкоцитами, капілярним тромбозом і экссудацией лейкоцитів. В деяких випадках формується гиалиновая мембрана, заповнююча альвеолярні протоки і альвеоли. В останніх стадіях є інфільтрація макрофагами, які озахватывают і видаляють десквамированные альвеолярні клітки.

Хвороба звичайно обмежується респіраторним трактом, дуже рідко під час пандемії 1957 року вірус ізолювався з селезінки, печінки, бруньк і інших органів.

Клінічні особливості. Інкубаційний період короткий – 12 - 72 години. Тягар захворювання варіює від помірного риніту до блискавичної і швидко смертю пневмонії, що закінчується, більшість захворювань протікає субклинически. При типовій клініці початок різке з лихоманкою, головним болем і загальною миалгией. Звичайно на перший план виступають дихальні симптоми і серйозна загальна слабість. Можуть бути болі в животі і блювота, особливо при грипі типу В у дітей, які можуть давати картину гострого живота. Неускладнена хвороба закінчується через 2 - 7 днів.

Найважливіше ускладнення - пневмонія, яка головним чином розвивається через повторну бактерійну інфекцію або рідше, викликана безпосередньо вірусом. Кардіальниє ускладнення типу застійної недостатності або міокардиту і неврологічних поразок типу енцефаліту бувають рідко.

Імунітет. Імунітет до специфічного підтипу вірусу, що розвивається після спалаху грипу, тривалий. Він обумовлений сумарно місцевими антитілами (IGA) в секретах слизових дихальних колій і специфічними IGG антитілами в сироватці. Імунітет до інфекції, особливо типом А, строго специфічний до сероподтипу і забезпечує невелику або взагалі не створює несприйнятливості до сероподтипам, володіючим імунологічно відмінними білками гемагглютинина або нейраминидазы.

Доказом стійкості імунітету при грипі може служити наступне. В 1977 р. повернувся вірус Н1N1 після 20-літньої відсутності. Епідемія почалася в Китаї. Захворювали майже виключно особи молодо 20 років, тобто народилися після 1957 р., коли припинилася циркуляція цього вірусу серед населення. Крім того, імунітет до вірусу грипу типу З, який не має антигенних варіантів, звичайно є довічним.

Епідеміологія. Епідемії, які були викликані, ймовірно, вірусами грипу, було описано вже більше 2000 років назад. Як правило, спостерігається раптова поява випадків респіраторного захворювання; вони тривають протягом декількох тижнів і потім раптово припиняються. Епідемії відбуваються часто з неоднаковими інтервалами і, як думали у свій час, були під впливом зірок, звідси і назва – «грип» (итал. вплив). Добре відомо, що епідемії змінюються по тягарю. Велика пандемія 1918-19 г.г. (іспанець) була особливо серйозною, вона понесла життя від 20 до 40 мільйонів людей, оскільки вона розповсюджувалася у всьому світі. Саме через це великі зусилля були направлені на спробу з'ясувати причину хвороби. Успіх прийшов в 1933 р., коли Крістофер Ендрю і ін. виділили вірус грипу А.

Тривалі дослідження по виділенню і вивченню виділених вірусів, дозволили зрозуміти зв'язок між поведінкою при епідемії і змінами вірусу. Стало також можливим встановити на підставі феномена первинного антигенного гріха, які вірусні антигени були распространенны перш, ніж стало можливим виділяти вірус. Це означає, що інфекція, викликана поточним вірусним типом, стимулює утворення антитіл до раніше циркулюючих штамів. Таким чином ми можемо встановити, які антигенні компоненти були поширені в кінці минулого сторіччя шляхом вивчення антитіл у немолодих осіб.

1890 ®	1900 ®	1918 ®	1957 ®	1968 ®	1977®
	Н2N2	Н3N8	Н1N1 (іспанець)	Н2N2 (азіатський грип)	Н3N2 (гонконгский грип)	Н3N2 + Н1N1	Н3N2 + Н1N1

Крупні пандемії пов'язані з антигенним шифтом - коли міняються вірусні Н або N, або ж обидва відразу. Ця зміна є дуже великою, щоб бути результатом мутації, і аналіз вірусною РНК указує, що зміна є результатом придбання нового повного 4-го і, або 5-го сегмента РНК. В лабораторних умовах легко показати, що, якщо клітка інфікована двома різними штамами вірусу, потомство буде містити вірус, молекули РНК якого отримані від кожного батька. Таким чином, «новий» вірус може бути результатом пересортовування, рекомбінації.

Віруси грипу А можуть бути виділені від птахів, включаючи морських птахів і качок, і це наводить на роздуми що, якщо такий вірус ко-инфицирует (тобто спільно заражає) клітку з циркулюючим людським штамом, гібридизація може приводити до того, що вірус грипу людини придбаває нові оболонкові антигени.

Дані про те, що антигенні варіанти, були викликаючими інфекцію у минулому, були виявлені у людини або інших видів тварин, дають можливість зробити висновок про існування обмеженого числа антигенів. До 1977 це було правилом, що, коли з'являвся «новий» вірус, «старий» исчезал. але починаючи з того часу циркулювали одночасно два підтипи, а саме Н3N2 і Н1N1. Останній антигенний варіант не виявлявся починаючи з 1950-го року.

У вірусів грипу В не виявляється антигенного шифту, як немає і резервуара серед тварин і, хоча епідемії відбуваються з інтервалом в 3-6 років, вони ніколи не досягають розмірів пандемії, і їхнє розповсюдження звичайно обмежується невеликими колективами типу шкіл - інтернатів або будинків старезних. Антигенні зміни є результатом мутації, також, як і виявляються у вірусу грипу А після появи «нових» вірусних штамів, зміни обумовлені дрейфом антигенів.

Періодичність спалахів грипу характерна, але збільшення поширеності всіх респіраторних вірусних інфекцій восени і взимку в країнах з помірним кліматом може маскувати епідеміологічну картину грипу. Захворюваність грипом може досягати 20-40%, і розповсюдження спалаху може бути швидким. Ймовірно, вдихання холодного повітря взимку може знижувати активність мерцательного епітелію у верхніх дихальних коліях і таким чином збільшувати захворюваність респіраторними інфекціями. Масове скупчення людей, наприклад в новорічних компаніях, може полегшувати розповсюдження вірусу. Крім того, за деякими даними, кількість клітинних рецепторів до вірусу може бути різною залежно від сезону.

ВІЗ контролює грип А і В у всьому світі, щоб виявити появу варіантів. Таким чином, можна прослідити розповсюдження підтипу варіанту в світі, звичайно з сходу на захід. Тягар і розповсюдження можна встановити шляхом розрахунку показників смертності.

Пікові кількість випадків наголошується з появою нового штаму. Це пов'язано з появою з інтервалом в рік-два вірусу, який антигенний «дрейфував» від материнського типу. Далі дрейф може приводити до подальших епідемій різної міри.

Високі показники захворюваності наголошуються у дошкільників, захворюваність нижче навіть у немолодих. Проте, немолоді пацієнти в будинках старезних, якщо вони не імунізовані, є групою особливого ризику важкого захворювання і раптової смерті. Таким чином, навіть якщо показник захворюваності і низький, коефіцієнт смертності високий. Інфекція може бути занесена персоналом, відвідувачами або іншими пацієнтами.

Вірус грипу типу З не асоціюється з епідеміями, але дає підвищення захворюваності гострими респіраторними інфекціями, особливо у дітей. Більшість інфекцій є бессимптомными.

Лабораторна діагностика. Заснована на вірусологічному і сірологічному методах дослідження. Вірусологічний метод використовується з метою виділення вірусу і його ідентифікації. Носоглоточнимі смывами, до яких для придушення бактерійної мікрофлори добавляють антибіотики або піддають ультрацентрифугированию, заражають 9—11-денні курячі ембріони або клітинні культури. Після 3—4 сут культивування вірус грипу виявляють за допомогою реакції гемагглютннации в аллантоисной і амниотической рідинах курячого ембріона, а в тканинних культурах—реакцією гемадсорбпии.

Ідентифікація вірусу проводиться за допомогою реакцій гальмування гемагглютинадии і нейтралізації вірусу з використанням специфічних иммуявых-сироваток.

Сірологічна діагностика передбачає виявлення наростання титру специфічних антитіл в сироватках хворих в динаміці захворювання за допомогою реакцій гальмування гемагглютинации, скріплення комплементу і нейтралізації вірусу. Для постановки цих реакцій кров беруть в перші дні хвороби и-в період одужання. У людей, що перехворіли, грипом титр антитіл збільшується в 4 разу і більш.

Окрім описаних методів, для діагностики грипу використовують експрес-метод, заснований на застосуванні прямій і непрямій иммунофлюоресценции. Для цього готують мазки-відбитки з відокремлюваного верхніх дихальних колій (носоглотки), в якому знаходяться клітки циліндрового епітелію, і обробляють їх типоспецифическимн сироватками, міченими флюорохромами. При перегляді мазків в люмінесцентному мікроскопі за наявності вірусу грипу в клітках циліндрового епітелію виявляється зеленувато-жовте свічення.

Лікування. Застосовують комплексну терапію, направлену на придушення репродукції вірусу грипу в організмі і нейтралізацію токсинів. Добрий результат отриманий при введенні в перші дні хвороби протигрипозного донорського иммуноглобулииа, сухої протигрипозної сироватки, лейкоцитарного інтерферону, а також хімічного препарату ремантадина. Попередження ускладнень досягається використанням антибіотиків в поєднанні з сульфаниламидами.

Профілактика. Грип передається повітряно-краплинною колією. Джерело інфекції – хворої грипом, який може інфікувати здорових людей при чханні, кашлі, і розмові.

Попередження грипу здійснюється шляхом ізоляції хворих, систематичного провітрювання приміщень і прибирання їхнім вологим способом (розчином хлораміну), гартування організму, заняття фізкультурою і спортом, запобігання протягів в житлових і робітниках приміщеннях.

Вакцинація. Грипозні вакцини використовувалися протягом багатьох десятиріч. Спочатку вакцини полягали з вірусу, який вирощували в аллантоисной порожнині курячих ембріонів, частково обчищеного і інактивованого формаліном. Через присутність яєчного білка, ця вакцина може викликати реакції у хворих з аллергозами. Цільна вірусна вакцина викликає лихоманку і місцеву хворобливість. Суб'едінічниє вакцини були запропоновані, щоб зменшити токсичні реакції. Обчищений вірус руйнують обробкою ефіром або дезоксихолатом так, щоб вакцина містила імуногенні субъединицы гемагглютинина і нейраминидазы.

Головна трудність в імунопрофілактиці грипу - часті зміни антигенних складових вірусу. Вакцини не можуть бути вироблені у великих кількостях і про запас, оскільки поява нового варіанту буде робити стару вакцину застарілою В країнах холодного клімату, де необхідно забезпечити захист старим людям і особам інших груп високого ризику, на практиці необхідно імунізувати їх вакциною, що містить самі останні штами вірусів типу А і У.

Найважливіше свідчення для імунопрофілактики - то, коли новий вірус загрожує пандемією. Тут, час, необхідне для виготовлення вакцини з новим варіантом є критичним, оскільки вірус, ймовірно, розповсюдиться швидко і інфікує цілі населені пункти перш, ніж вакцина стає доступною. Крім того, найсвіжіші изоляты (виділені віруси), не ростуть добре в курячих ембріонах, поки вони не пройшли послідовне страхування. Щоб подолати ці перешкоди, була запропонована рекомбинантная вакцина. Рекомбінант володіє особливостями зростання старих стабілізованих штамів і несе поверхневі антигени нового варіанту. Рекомбінант буде рости добре в курячих ембріонах, що полегшує виробництво вакцини.

Тоді як вбиті вакцини стимулюють формування циркулюючих антитіл, вони не приводять до якого-небудь місцевого захисту в дихальних коліях.

Для створення специфічного місцевого імунітету використовувалися живі вакцини. Сама рання жива вакцина готувалася з вірусу, аттенуированного послідовними пасажами на курячих ембріонах. Вона застосовувалася интаназально. Проте, вона іноді викликала захворювання, особливо у дітей.

Інший підхід до отримання живих вакцин - використання чутливих до температури мутантів. Можуть бути легко виділені мутанти, які здатні розвиватися при більш низькій температурі слизової оболонки носоглотки (при 32 -34 °З) але не в легенях при 37 " З. Такі ts- мутанти авирулентны. Рекомбінантиє живі вакцини можуть бути отримані шляхом гібридизації між ts-мутантами стабілізованих штамів і новим антигенним варіантом.

Ефективна химиопрофилактика ремантадином, який пригнічує адсорбцію вірусу грипу типу А до кліток. Застосовують також інтерферон і протигрипозний імуноглобулін.

Лабораторний діагноз.

1. Виявлення вірусного антигена. Швидкий діагноз грипу може встановлений шляхом виявлення вірусного антигена на поверхні кліток носоглотки методом иммунофлюоресценции. З мазків, узятих тампоном з носа і відокремлюваного носоглотки або осідання після центрифугирования носоглоточных смывов готують мазки-препарати, обробляють люминесцирующей сироваткою супроти вірусу грипу і досліджують під люмінесцентним мікроскопом. Виявляються клітки, флюоресцирующие через присутність на їхній поверхні вірусних антигенів. Цей метод не є ані так же надійним, ані так же чутливим, як виділення вірусу.

2. Виділення вірусу. Виділити вірус достатньо легко від хворих протягом перших двох або трьох днів хвороби, але звичайно не в більш пізніх стадіях. Носоглоточниє смывы збирають, використовуючи відповідний сольовий буферний розчин. Якщо матеріал не може бути оброблений негайно, його потрібно берегти при 4 єС, або, якщо термін затримки є великим, при – 70 єC. Досліджуваний матеріал потрібно обробити антибіотиками, щоб знищити бактерії. Виділяти вірус можна на курячих ембріонах або в культурі кліток бруньк мавпи.

Матеріал вводять в амниотическую порожнину 11-13 денних курячих ембріонів, використовуючи принаймні шість ембріонів для кожного дослідження. Після інкубації в 35 єC протягом трьох днів, ембріони охолоджують і збирають роздільно амниотическую і аллантоисную рідини. Їх випробовують в реакції гемагглютинации, використовуючи паралельно еритроцити морської свинки і курячі еритроцити при кімнатній температурі і при 4 єС. Деякі свіжовиділені штами вірусу грипу типу А склеюють тільки еритроцити морської свинки. Віруси типу В аглютинують обидва види еритроцитів, тоді як штами вірусу типу З склеюють тільки курячі еритроцити при 4 єС.

Якщо немає гемагглютинации, проводять «сліпий}rdblquote пасаж гомогенатов легенів і печінки ембріона через іншу партію ембріонів, що іноді приводить до відновлення вірусу. Ізоляти ідентифікують і типируют в реакцією скріплення комплементу з антисироватками до типів А, В і З. Ідентифікація сероподтипа проводиться в реакції гальмування гемагглютинации (РТГА). Частина сучасних штамів типу А може бути виділено при первинному введенні клінічного матеріалу в порожнину аллантоиса 9-11 –добових курячих ембріонів. Проте, віруси типів В, і З не будуть виявлені, якщо застосовується тільки зараження в порожнину аллантоиса.

Зараження культур кліток бруньк мавпи або інших придатних культур кліток, що перевиваються, майже так же ефективно, як і зараження курячих ембріонів для виділення вірусу типу А і трохи більш чутливо для штамів типу В. Розмноження вірусу може бути виявлено при дослідженні культуральної рідини в реакції гемагглютинации і гемадсорбции. Швидкі результати можуть бути отримані при виявленні вірусного антигена в заражених клітках в реакції иммунофлюоресценции.

3. Сірологічна діагностика.

Для сірологічної діагностики грипу використовуються реакція скріплення комплементу і реакція гальмування гемагглютинции. Істотно досліджувати парні сироватки, виявляючи наростання титру антитіл. Реакції скріплення комплементу з РНП антигеном типів вірусу грипу А, В і З дуже корисні, оскільки антитіла утворюються при інфекції, але не після імунізації інактивованими вакцинами. Реакція скріплення комплементу може також бути поставлена з використанням V - антигенів для виявлення штаммоспецифических антитіл. Через свою складність, РСЬК використовується тепер рідко.

Реакція гальмування гемагглютинации - удобноая і чутлива реакція для сірологічного діагнозу грипу. Проте, вона має деякі недоліки. Оскільки антитела-антигемагглютинины є специфічними до сероподтипу, необхідно використовувати яка антигена-диагностикума штам, що викликав інфекцію в даний час.

Головна перешкода - часта присутність в сироватці неспецифічних інгібіторів гемагглютинации. Сироватки, відповідно оброблені для видалення неспецифічних інгібіторів, розбавляються послідовно в лунках планшетів плексигласів для гемагглютинации і в кожну лунку добавляють суспензію вірусу грипу, що містить 4 ГАЄ (гемагглютинирующих одиниць). Потім добавляють курячі еритроцити. Щонайбільше розведення сироватки, яке пригнічує гемагглютинацию є титром сироватки.

Антитіла до нейраминидазе можна визначити в реакції нейтралізації нейраминидазной ферментативной активності. Проте, вони дуже трудомісткі для звичайного використання.

Реакція радіальною иммунодиффузии агарозном гелі була описана для ідентифікації антитіл до РНП антигена, гемагглютинину і нейраминидазе. Проте, вони більш корисні як тести для виявлення прихованої форми захворювання чим для звичайного діагнозу.

ПАРАМІКСОВІРУСИ

В сімейство Paramyxoviridae включено три роди – Paramyxovirus, Morbilivirus і Pneumovirus, містять патогенні для людини віруси.

Віруси мають сферичну форму, діаметр 100 - 300 нм. Нуклеокапсид оточений липидно-углеводно-протеиновой оболонкою. Володіють гемагглютинирующей, гемолитической і нейраминидазной активністю, здатністю утворювати синцитий в клітинних культурах і эозинофильные цитоплазматические включення; в антигенному відношенні характеризується різноманіттям. У людей парамиксовирусы викликають парагрипп, епідемічний паротит, кір і РС-інфекцію.