Вызываемых энтеробактериями 6 страница

Посевы для воспроизведения других тестов не требует специальных пояснений, учет результатов см. табл. 9.

На этапе дифференциации родов могут быть использованы пробы с поливалентными сальмонеллезными и дизентерийным бактериофагами (диагностические жидкие или лечебные в таблетках). Таблетку лечебного фага перед постановкой пробы растворяют в 20 мл ИХН. Для воспроизведения пробы с фагом используют 2-х или 18-часовую бульонную культуру, можно применять также взвесь суточной агаровой культуры в ИХН. Тонко оттянутой пастеровской пипеткой или петлей диаметром 4 - 5 мм наносят две капли испытуемой культуры на хорошо подсушенный СПА в чашке Петри. На одну из капель после подсыхания наносят петлей или из очень тонкого капилляра пастеровской пипетки каплю фага, а на другую (служащую контролем) - каплю стерильного бульона. Бактериофаг применяют в неразведенном виде или в разведениях в соответствии с "Наставлением" к препарату. После постановки пробы чашки инкубируют при 37 °C в течение 18 - 20 часов. При положительной реакции на месте нанесения фага появляется четко очерченный лизис (++++), полусливной лизис (+++), большее или меньшее число отдельных негативных колоний (++, +). При отсутствии лизиса (отрицательная реакция) в местах нанесения фага, как и в контроле, наблюдают сплошной рост культуры.

Как указывалось ранее, на этапе дифференциации родов возможна постановка ориентировочных серологических проб с поливалентными агглютинирующими сыворотками к сальмонеллам и шигеллам. При этом используют соответственно поливалентную смесь к сальмонеллам групп ABCDE (при отрицательном результате пробу повторяют со смесью O-сывороток к сальмонеллам редких групп) и поливалентную смесь сывороток к S. sonnei, S. flexneri 1 - 5, S. flexneri 6. Указанные ориентировочные пробы выполняют путем постановки реакции агглютинации на стекле с культурой, выросшей на среде первичной идентификации. В ходе исследования на ЭПЭ, как указывалось ранее, при отборе соответствующих колоний, давших агглютинацию с OKA сывороткой, делают посев не только на среду первичной идентификации, но и на скошенный СПА. Серологическое изучение эшерихий проводят с культурами, выращенными на скошенном СПА. Культуры, подозреваемые на принадлежность к ЭПЭ, исследуют повторно с поливалентной сывороткой OKA и при положительном результате с OKB, OKC, OKD, OKE или соответствующими OK-иммуноглобулинами. При наличии положительной реакции культуру засевают в среды минимального дифференцирующего ряда (табл. 7) для подтверждения принадлежности культуры к роду Escherichia (в первую очередь ацетатную, цитратную Кристенсена и на подвижность).

Помимо постановки тестов, необходимых для установления родовой принадлежности выделенной культуры энтеробактерий, со среды первичной идентификации делают также высев на скошенный СПА, используемый для дальнейшей биохимической и серологической идентификации.

2.3.3. Идентификация видов и внутривидовая дифференциация

Идентификация видов и внутривидовая дифференциация энтеробактерий составляет заключительный этап бактериологического исследования различных материалов. В большинстве случаев идентификация видов энтеробактерий предусматривает применение дополнительных к использованным на предыдущем этапе (определения рода) биохимических тестов из минимального дифференцирующего ряда.

Для патогенных, а также для некоторых условно патогенных энтеробактерий, идентификация включает, кроме биохимической, и серологическую характеристику. Последняя обеспечивает тонкую дифференциацию энтеробактерий вплоть до определения серовидов и подсеровидов (например, для Shigella flexneri).

Другие возможности внутривидовой дифференциации, основывающиеся на особенностях взаимодействия с препаратами бактериофагов, на феномене колициногении или определении биоваров реализуются при наличии соответствующих эпидемиологических показаний и изложены в следующем разделе "Методических указаний".

Род Shigella в соответствии с действующей в СССР Международной классификацией разделен на 4 подгруппы (A, B, C, D), соответствующие видам: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei (табл. 10).

Таблица 10

КЛАССИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ РОДА SHIGELLA <*>

--------------------------------

<*> Приведена принятая в СССР Международная классификация шигелл с учетом внесенных в нее в 1982 г. Международным подкомитетом по энтеробактериям изменений и дополнений:

1) вид S. dysenteriae дополнен сероварами 11 и 12, ранее известными как провизорные (временные) серовары 3873-50 и 3341-55 соответственно;

2) серовар 3 S. flexneri включают ныне два подсеровара - 3a и 3b;

3) серовар 5 S. flexneri разделен на подсеровары 5a и 5b;

4) вид S. boydii дополнен сероварами 16, 17 и 18, ранее известными как провизорные серовары 2710-54, 3615-53 и E10163 соответственно.

┌─────────┬──────────────┬─────────┬──────────┬──────────────────┐

│Подгруппа│ Вид │ Серовар │Подсеровар│ Сокращенная │

│ │ │ │ │антигенная формула│

├─────────┼──────────────┼─────────┼──────────┼──────────────────┤

│A │S. dysenteriae│1 - 12 │ │ │

│B │S. flexneri │1 │1a │I:4... │

│ │ │ │1b │I:6... │

│ │ │2 │2a │II:3,4... │

│ │ │ │2b │II:7,8... │

│ │ │3 │3a │III:(3,4),6,7,8...│

│ │ │ │3b │III:(3,4),6... │

│ │ │4 <**> │4a │IV:3,4... │

│ │ │ │4b │IV:6... │

│ │ │5 │5a │V:3,4... │

│ │ │ │5b │V:7,8... │

│ │ │6 │- │VI:... │

│ │ │X-variant│- │-:7,8... │

│ │ │Y-variant│- │-:3,4... │

│C │S. boydii │1 - 18 │- │ │

│D │S. sonnei │- │- │ │

└─────────┴──────────────┴─────────┴──────────┴──────────────────┘

--------------------------------

<**> С конца 70-х годов в СССР стали выделяться S. flexneri 4 с антигенной формулой (IV:7,8), не предусмотренной Международной классификацией шигелл.

Основные тесты для дифференциации указанных видов представлены в табл. 11, а для их внутривидовой дифференциации в табл. 12 - 14.

Таблица 11

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ВИДОВ SHIGELLA ПО БИОХИМИЧЕСКИМ СВОЙСТВАМ

┌─────────────┬─────────────┬────────────────┬─────────┬─────────┐

│ Тест или │S. dysente- │ S. flexneri │S. boydit│S. sonnei│

│ субстрат │riae ├────────┬───────┤ │ │

│ │ │серовары│серовар│ │ │

│ │ │ 1 - 5 │ 6 │ │ │

├─────────────┼─────────────┼────────┼───────┼─────────┼─────────┤

│Маннит │- │+ │+, - │+ │+ │

│Глюкоза (газ)│- │- │-, + │- <**> │- │

│Лактоза │- │- │- │- <**> │(+) │

│Индол │-, + │-, + │- │-, + │- │

│Глицерин │X │- │+, (+) │+, (+) │X │

│Орнитин │- │- │- │- <**> │+, (+) │

│Сорбит │X │X │X │X │- │

│Дульцит │- <*> │- │X │X │- │

│Ксилоза │X │- │X │X │X │

│Рафиноза │- │ │- │- │X │

└─────────────┴─────────────┴────────┴───────┴─────────┴─────────┘

--------------------------------

<*> S. dysenteriae 5 ферментируют дульцит.

<**> S. boydii 6 и 14 могут образовывать газ, S. boydii 13 декарбоксилируют орнитин, S. boydii 9 могут замедленно ферментировать лактозу.

Таблица 12

БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СЕРОВАРОВ S. DYSENTERIAE

┌────────┬────────┬────────┬────────┬─────────┬────────┬─────────┐

│Серовар │ Индол │Дульцит │Рамноза │ Ксилоза │ Сорбит │Арабиноза│

├────────┼────────┼────────┼────────┼─────────┼────────┼─────────┤

│1 │- │- │- │- │- │-, + │

│2 │+ │- │+ │- │X │-, + │

│3 │- │- │- │- │+, (+) │+, (+) │

│4 │- │- │- │- │-, (+) │-, + │

│5 │- │+, (+) │- │- │+, (+) │+ │

│6 │- │- │- │- │+, (+) │-, + │

│7 │+ │- │-, (+) │- │- │+ │

│8 │+ │- │- │+ │- │+ │

│9 │- │- │- │-, (+) │-, + │+ │

│10 │- │- │- │+ │+, (+) │+ │

│11 │- │- │- │(+) │(+) │+ │

│12 │- │- │-, + │(+) │(+) │+ │

└────────┴────────┴────────┴────────┴─────────┴────────┴─────────┘

Таблица 13

БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СЕРОВАРОВ S. FLEXNERI

┌───────────────┬───────────────┬────────────────┬───────────────┐

│ Серовар │ Индол │ Сорбит │ Рамноза │

├───────────────┼───────────────┼────────────────┼───────────────┤

│1 │-, + │-, + │- │

│2 │-, + │-, + │- │

│3 │+, - │X │X │

│4 │+, - │X │X │

│5 │+, - │X │- │

│X-variant │+, - │+, - │-, (+) │

│Y-variant │-, + │-, + │-, (+) │

└───────────────┴───────────────┴────────────────┴───────────────┘

Таблица 14

БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СЕРОВАРОВ S. BOYDII

┌────────────┬────────────┬────────────┬────────────┬────────────┐

│ Серовар │ Индол │ Дульцит │ Ксилоза │ Сорбит │

├────────────┼────────────┼────────────┼────────────┼────────────┤

│1 │- │- │(+), + │(+), + │

│2 │- │- │- │-, (+) │

│3 │- │X │X │+ │

│4 │- │-, (+) │- │X │

│5 │+ │- │(+) │+, (+) │

│6 │- │(+) │+ │+, (+) │

│7 │+ │- │+ │+, (+) │

│8 │- │- │X │+, (+) │

│9 │+ │- │- │+, (+) │

│10 │- │X │X │X │

│11 │+ │-, (+) │+, (+) │X │

│12 │- │- │- │X │

│13 │+ │- │- │+, (+) │

│14 │- │- │(+), + │+, (+) │

│15 │+ │- │- │+, (+) │

│16 │+ │- │+ │- │

│17 │+ │- │+ │+, (+) │

│18 │- │- │(+) │(+) │

└────────────┴────────────┴────────────┴────────────┴────────────┘

Серологическую идентификацию шигелл проводят с помощью адсорбированных сывороток. Исследование начинают с основной поливалентной сыворотки, содержащей антитела к S. flexneri 1 - 6 и S. sonnei. При положительном результате далее используют поливалентные сыворотки к S. flexneri 1 - 5, S. sonnei (I и II фаза) и сыворотку к S. flexneri 6 (с учетом этиологической структуры дизентерии в данной местности). Учитывают и данные о биохимических свойствах выделенной культуры шигелл: например, шигеллы, образующие индол, не следует агглютинировать в сыворотках к S. sonnei и к S. flexneri 6 (S. newcastle).

Установление антигенной формулы S. flexneri (см. табл. 10) начинают с применения сероварспецифических сывороток (к антигенам I, II, III, IV, V, VI), а затем групповых (3, 4; 6; 7, 8). Порядок исследования также зависит от пейзажа сероваров шигелл в регионе. При работе с культурами S. flexneri надо помнить, что иногда свежевыделенные штаммы слабо агглютинируются, особенно в сыворотке к групповым антигенам 3, 4. В таких случаях следует для повышения агглютинабельности провести 1 - 2 пассажа 4-часовой бульонной культуры с высевом на скошенный СПА. Если культура агглютинирует в сыворотке к S. sonnei, серологическая ее идентификация считается завершенной.

Бактерии, принадлежащие по культуральным и биохимическим свойствам к шигеллам, но не агглютинирующиеся в основной поливалентной сыворотке, испытывают с поливалентными сыворотками к другим видам шигелл: к S. dysenteriae (если они не сбраживают маннит) или к S. boydii (в случае маннитферментирующих штаммов). При положительной реакции в одной из примененных сывороток культуру испытывают с сероварспецифическими сыворотками, входящими в данную поливалентную смесь.

Некоторые шигеллы (S. dysenteriae, S. flexneri 6, S. boydii) могут иметь хорошо развитые Y-антигенны, вследствие чего живые культуры не агглютинируются в соответствующих сыворотках. Взвеси таких культур в ИХН следует прогреть в водяной бане при 100 °C в течение 1 часа. При этом обязателен контроль культуры до кипячения на спонтанную агглютинацию в капле ИХН, для ее исключения.

В случаях каких-либо затруднений при серологической идентификации шигелл необходимо провести рассев штамма в чашке с дифференциальной средой (ЭМС или Эндо) с целью проверки чистоты культуры и повторно провести биохимическую идентификацию.

Род Salmonella согласно Определителю Берги (1980) состоит из четырех подродов (см. табл. 1), дифференциацию которых проводят с использованием биохимических тестов, приведенных в табл. 15.

Таблица 15

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПОДРОДОВ SALMONELLA

ПО БИОХИМИЧЕСКИМ СВОЙСТВАМ

┌────────────────────┬───────────────────────────────────────────┐

│ Тест или субстрат │ Подроды │

│ ├──────────┬──────────┬──────────┬──────────┤

│ │ I │ II │ III │ IV │

├────────────────────┼──────────┼──────────┼──────────┼──────────┤

│Дульцит │+ │+ │- │- │

│Лактоза │- │- │X │- │

│Салицин │- │- │- │+ │

│Малонат натрия │- │+ │+ │- │

└────────────────────┴──────────┴──────────┴──────────┴──────────┘

Дальнейшую идентификацию представителей рода Salmonella проводят согласно антигенно-диагностической схеме Кауфмана-Уайта (табл. 16) с применением коммерческих агглютинирующих сывороток. Как указывалось ранее (см. схему 1) ориентировочная проба в реакции агглютинации на стекле с поливалентной сывороткой к сальмонеллам O-групп ABCDE (к антигенам 2, 4, 7, 8, 9, 3, 10), а при ее отрицательном результате и с поливалентной сывороткой к сальмонеллам редких O-групп (к антигенам 11, 18, 14, 16, 17, 23 и др.) возможна еще на этапе определения рода. После подтверждения биохимическими тестами принадлежности выделенной культуры к роду Salmonella реакции с поливалентными сыворотками повторяют и переходят к определению O-групп сальмонелл (по схеме Кауфмана-Уайта) с помощью отдельных O-сывороток, входящих в соответствующую поливалентную.

Таблица 16

СХЕМА КАУФМАНА-УАЙТА (СОКРАЩЕННАЯ)

┌──────┬─────────────────────────┬─────────────────┬──────────────────────┐

│Группа│ Серовар │ O-антиген │ H-антиген │

│ │ │ ├────────────┬─────────┤

│ │ │ │ 1 фаза │ 2 фаза │

├──────┼─────────────────────────┼─────────────────┼────────────┼─────────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │

├──────┼─────────────────────────┼─────────────────┼────────────┼─────────┤

│A │S. paratyphi A │1, 2, 12 │a │(1, 5) │

│B │S. kisangani │1, 4, (5), 12 │a │1, 2 │

│ │S. arechavaleta │4, (5), 12 │a │(1, 7) │

│ │S. bispebjerg │1, 4, (5), 12 │a │e, n, x │

│ │S. schleiasheim │4, 12, 27 │b │- │

│ │S. paratyphi B │1, 4, (5), 12 │b │1, 2 │

│ │S. java │1, 4, (5), 12 │b │(1, 2) │

│ │S. abony │1, 4, (5), 12, 27│b │e, n, x │

│ │S. abortusbovis │1, 4, 12, 27 │b │e, n, x │

│ │S. wagenia │1, 4, 12, 27 │b │e, n, z15│

│ │S. wien │1, 4, 12, 27 │b │l, w │

│ │S. abortusovis │4, 12 │c │1, 6 │

│ │S. altendorf │4, 12, 27 │c │1, 7 │

│ │S. stanley │1, 4, (5), 12, 27│d │1, 2 │

│ │S. saintpaul │1, 4, (5), 12 │e, h │1, 2 │

│ │S. reading │1, 4, (5), 12 │e, h │1, 5 │

│ │S. chester │1, 4, (5), 12 │e, h │e, n, x │

│ │S. san-diego │4, (5), 12 │e, h │e, n, z15│

│ │S. derby │1, 4, (5), 12 │f, g │(1, 2) │

│ │S. agona │1, 4, 12 │f, g, s │- │

│ │S. essen │4, 12 │g, m │- │

│ │S. budapest │1, 4, 12, 27 │g, t │- │

│ │S. typhimurium │1, 4, (5), 12 │i │1, 2 │

│ │S. agama │4, 12 │i │1, 6 │

│ │S. texas │4, (5), 12 │k │e, n, z15│

│ │S. azteca │4, (5), 12, 27 │l, v │1, 5 │

│ │S. bredeney │1, 4, 12, 27 │l, v │1, 7 │

│ │S. brandenburg │1, 4, 12 │l, v │e, n, z15│

│ │S. heidelberg │1, 4, (5), 12 │r │1, 2 │

│ │S. bradford │4, 12, 27 │r │1, 5 │

│ │S. africana │4, 12 │r, i │l, w │

│ │S. stanleyville │1, 4, (5), 12, 27│z4, z23 │(1, 2) │

│ │S. haifa │1, 4, (5), 12 │z10 │1, 2 │

│ │S. shubra │4, (5), 12 │z │1, 2 │

│C │S. paratyphi C │6, 7 (vi) │c │1, 5 │

│ 1 │S. choleraesuis │6, 7 │ │1, 5 │

│ │var. kunsendorf │ │ │ │

│ │S. cholerae-suis │6, 7 │c │1, 5 │