Вызываемых энтеробактериями 10 страница

2.4. Формулировка ответов, сроки выдачи

1. В отчете о выделении патогенных энтеробактерий название микроорганизма следует давать в латинской транскрипции, указывая его род, вид, серологическую характеристику; в случаях определения эпидмаркеров эти данные указывают после названных.

Наименование сероваров эшерихий приводят по их антигенным формулам с указанием O-, K-, H-антигенов (для энтеропатогенных разновидностей); O- H-антигенов - для возбудителей парентеральных эшерихиозов.

Например: "Выделены S. flexneri (Shigella flexneri) 4a (биовар 7)"

"Выделены S. typhi (Salmonella typhi)"

"Выделены E. coli (Escherichia coli) 055:K59:H2" или

"Выделены E. coli (Escherichia coli) 01:H4".

2. При выделении УПЭ в отсутствие патогенных энтеробактерий вначале следует указать: "Патогенные энтеробактерии не выделены, выделены _________".

Для УПЭ правила написания рода и вида выделенных бактерий те же, что в пункте 1.

В случаях проведения количественных определений УПЭ после их названия

указывают: "______ 10 КОЕ/г (мл)" <*>.

--------------------------------

<*> КОЕ - колониеобразующая единица.

Если дозированные посевы не применяли (количественные определения не проводили), однако в прямом посеве на пластинчатых средах очевидно преобладание однородных колоний названного вида (при исследованиях материалов, имеющих собственную микрофлору), следует указать: "_______ обильный рост <**> ________" или "________ абсолютное преобладание ________".

--------------------------------

<**> Сплошной рост не поддающихся подсчету колоний установленного вида.

3. Отрицательный ответ при бактериологических исследованиях на выделение патогенных энтеробактерий может быть выдан в следующие сроки: при исследовании крови - на 10-й день исследования после четырех высевов на пластинчатые среды;

при исследовании желчи (дуоденального содержимого) - на 8-й день исследования после 4-х высевов на пластинчатые среды;

при исследовании мочи, испражнений, секционного материала без использования сред обогащения (при отсутствии "подозрительных колоний" на пластинчатых средах первичного посева) - на 2-й день исследования;

то же с использованием сред обогащения (при отсутствии "подозрительных колоний" на пластинчатых средах, засеянных со сред обогащения) - на 3-й день исследования;

при отсутствии в прямых посевах на пластинчатые среды колоний, дающих агглютинацию на стекле с OKA-сывороткой эшерихий, - 2-й день исследования - выдают ответ об отсутствии эшерихий серологических групп, представленных в OKA поливалентной агглютинирующей сыворотке.

При оценке этиологической значимости выделения УПЭ из клинических материалов, обладающих в норме собственной микрофлорой, могут быть использованы следующие данные:

а) количественный показатель - наличие установленных УПЭ при высевах на

-5 -6

пластинчатые среды из 10 - 10 разведения исследуемого материала, т.е.

содержание УПЭ - 10 КОЕ и более на 1 г исследованного субстрата;

б) повторность выделения идентичных микроорганизмов в значительных, особенно нарастающих количествах и исчезновение в период реконвалесценции;

в) ответная реакция макроорганизма - нарастание титра антител к обнаруженным УПЭ при исследовании в динамике ("парных" сывороток) в период до 10 - 14 дней от начала заболевания.

3. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ <*>

--------------------------------

<*> Для приготовления питательных сред используют химически чистые реактивы.

3.1. Консерванты

Глицериновый

Состав: Натрий хлорид (NaCl), 0,85-процентный раствор - 1000 мл

Глицерин нейтральный - 500 мл

Натрий гидрофосфат, безводный (Na HPO),

2 4

20-процентный раствор - 150 мл

Приготовление: смешивают первые два ингредиента и добавляют раствор гидрофосфата натрия в таком количестве, чтобы довести pH до 7,8 - 8,0, затем разливают в пробирки или флаконы по 10 мл, стерилизуют в автоклаве при 112 °C в течение 15 минут или текучим паром 3 дня подряд. После стерилизации pH 7,6 - 7,8.

Фосфатно-буферный

Состав: Калий дигидрофосфат (KH PO) - 0,45 г

2 4

Натрий гидрофосфат, безводный (Na HPO) - 5,34 г

2 4

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: ингредиенты смешивают, разливают по 10 мл в пробирки или флаконы, стерилизуют в автоклаве при 121 °C 30 минут.

Буферный глицерино-солевой

Состав: Натрий хлорид (NaCl) - 4,2 г

Калий гидрофосфат (K HPO) - 3,1 г

2 4

Калий дигидрофосфат (KH PO) - 1,0 г

2 4

Глицерин нейтральный - 300 мл

Вода дистиллированная - 700 мл

Приготовление: ингредиенты растворяют, перемешивают, смесь разливают в стерильные пробирки по 5 мл и автоклавируют при 112 °C 30 минут. Рекомендуется с целью контроля в процессе хранения раствор слабо подкрашивать феноловым красным.

Изотонический раствор хлорида натрия

Состав: Натрий хлорид (NaCl) - 6,5 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: соль растворяют при подогревании, фильтруют, разливают в пробирки по 5 - 7 мл, стерилизуют при 121 °C 30 минут.

3.2. Среды обогащения <*>

--------------------------------

<*> Для получения сред обогащения двойной концентрации (при исследовании жидких материалов) соответственно уменьшают вдвое объем дистиллированной воды.

Селенитовая среда

Состав: Натрий гидроселенит (NaHSeO)

без примеси теллура - 4 г

Пептон венгерский "Рихтер"

или чехословацкий "Спофа" - 5 г

Натрий гидрофосфат, безводный (Na HPO) - 7 г

2 4

Натрий дигидрофосфат, безводный (NaH PO) - 2 г

2 4

Лактоза - 4 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: среду готовят из двух основных растворов.

Раствор I. Определяют пропорцию Na HPO и NaH PO используемым образцом

2 4 2 4

пептона и гидроселенита натрия для установления pH в пределах 6,9 - 7,1, с

этой целью регулируют соотношение фосфатов. Подтитровка нужна всегда при

изменении серии любого из входящих в среду основных ингредиентов. После

установления соотношения фосфатов к раствору I добавляют пептон и лактозу.

Разливают во флаконы по 50 мл и стерилизуют текучим паром два дня по 30

минут. Количество фосфатов в рецепте среды дано в расчете на безводные

препараты. При отсутствии таковых заранее заготовленные навески

"выветривают" в термостате в течение 15 - 16 суток.

Раствор II. 10-процентный раствор гидроселенита натрия готовят на стерильной дистиллированной воде перед употреблением. Перед началом работы в каждый флакон с 50 мл основного раствора (I) добавляют 2 мл раствора гидроселенита натрия (раствора II), асептически разливают по 5 - 7 мл в стерильные пробирки и закрывают плотно пробками. Дальнейшая стерилизация не требуется.

Основной раствор (I) для среды можно хранить в холодильнике 1 - 2 месяца. Для приготовления среды следует использовать высококачественный пептон ("Рихтер", "Спофа" или жидкий аминопептид - отечественный заменитель импортного пептона).

Селенитовый бульон с аминопептидом

Состав: Бульон аминопептидный - 950 мл

Натрий гидрофосфат (Na HPO) - 8 г

2 4

Натрий дигидрофосфат (NaH PO) - 2 г

2 4

Натрий гидроселенит (NaHSeO),

10-процентный водный раствор - 40 мл

Приготовление: реакцию среды не устанавливают, т.к. pH колеблется в пределах 7,1 - 7,2. Стерилизуют при 112 °C 20 минут. Непосредственно перед употреблением добавляют 40 мл стерильного 10-процентного водного раствора натрия гидроселенита (pH при этом снижается на 0,1 - 0,2), среду хорошо перемешивают и асептически разливают в стерильные пробирки по 5 мл.

Примечание: фосфаты натрия могут быть заменены калийными в тех же количествах.

Приготовление аминопептидного бульона

Состав: Аминопептид - 250 мл

Натрий хлорид (NaCl) - 5,5 г

Вода дистиллированная - 750 мл

Приготовление: среду хорошо перемешивают, стерилизуют при 121 °C 20 мин. Готовый бульон можно хранить в бутылях неопределенный срок, желательно при 6 - 10 °C.

Магниевая среда

Состав: готовят три раствора.

Раствор I.

Пептон - 4,2 г

Натрий хлорид (NaCl) - 7,15 г

Калий дигидрофосфат (KH PO) - 1,48 г

2 4

Дрожжевой диализат - 9 мл

Вода дистиллированная - 890 мл

Раствор II.

Магний хлорид (MgCl х 6H O) - 35,7 г

2 2

Вода дистиллированная - 90 мл

Раствор III.

Бриллиантовый зеленый, 0,5-процентный водный раствор - 0,9 мл

Приготовление: все три раствора в указанных количествах смешивают, разливают в необходимых объемах в колбы, флаконы или пробирки, стерилизуют при 112 °C 30 минут.

Среда Мюллера

(тетратионатовый бульон Мюллера)

Состав: Мел, стерилизованный сухим жаром, - 45 г

или

Кальций карбонат (CaCO), сухой стерильный - 25 г

Бульон Хоттингера, содержащий 120 - 180 мг

аминного азота - 900 мл

Раствор Люголя - 20 мл

Натрий тиосульфат (Na S O х 5H O) <*>,

2 2 3 2

50-процентный стерильный раствор - 100 мл

--------------------------------

<*> Тиосульфат натрия (Na S O х 5H O) часто неправильно именуют

2 2 3 2

гипосульфитом.

Приготовление: в стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела, стерилизуют сухим жаром, после чего в каждый флакон наливают по 90 мл бульона Хоттингера. Стерилизуют при 121 °C 30 минут, pH 7,2 - 7,4. Затем ex tempore асептически добавляют в каждый флакон точно по 2 мл раствора Люголя и по 10 мл раствора натрия тиосульфата, хорошо смешивают и разливают по пробиркам. Готовая среда стерилизации не подлежит.

Приготовление растворов: а) раствора Люголя

Калий иодид (KI) - 20 г

Йод кристаллический - 25 г

Вода дистиллированная - 100 мл

б) 50-процентного раствора натрия тиосульфата

В измерительный цилиндр насыпают 50 г натрия тиосульфата и добавляют воду до 100 мл, растворяют, переливают во флакон, стерилизуют текучим паром 30 минут.

Среда Кауфмана

Состав: Среда Мюллера (стерильная) - 500 мл

Желчь бычья (стерильная) - 250 мл

Бриллиантовый зеленый (0,1-процентный

водный раствор) - 50 мл

Приготовление: ингредиенты смешивают, асептически разливают в стерильные пробирки по 10 мл, дополнительно не стерилизуют.

20-процентный желчный бульон

Состав: Бульон мясопептонный или Хоттингера - 800 мл

Желчь бычья нативная - 200 мл

Приготовление: pH должен быть равен 7,6. Разливают в стерильные пробирки или флаконы. Стерилизуют паром 2 дня по 30 минут.

Среда Рапопорт

Состав: Бульон мясопептонный или Хоттингера - 900 мл

Желчь бычья - 100 мл

Глюкоза - 20 г

Индикатор Андреде - 10 мл

Приготовление: ингредиенты смешивают, разливают по 50 мл во флаконы с поплавками. Стерилизуют текучим паром три дня по 30 минут.

Бульон с 0,2% глюкозы для клебсиелл

Состав: Бульон питательный pH 7,2 - 7,4 (стерильный) - 100 мл

Глюкоза - 2 г

Приготовление: в небольшом количестве теплого бульона растворяют глюкозу, раствор добавляют к остальному бульону, тщательно перемешивают, разливают в стерильные пробирки по 5 - 6 мл, стерилизуют при 112 °C 30 минут.

Буферная среда обогащения для иерсиний

Состав. Натрий хлорид (NaCl) - 8,5 г

Натрий гидрофосфат (Na HPO х 12H O) 1/15 М раствор - 3 мл

2 4 2

Калий дигидрофосфат (KH PO) 1/15 М раствор - 7 мл

2 4

Вода дистиллированная - 990 мл

Приготовление: предварительно готовят по 100 мл 1/15 М растворов указанных солей. Затем к ИХН добавляют необходимое количество приготовленных растворов, смешивают, фильтруют, разливают в пробирки по 5 - 6 мл и стерилизуют при 116 °C 10 минут или 30 минут текучим паром, pH среды 7,2.

3.3. Среды для первичных посевов материала

и высевов со сред обогащения

Среды Плоскирева, ЭМС-агар, Эндо, ВСА выпускают в сухом виде. Приготовление сред из сухих препаратов в соответствии с указаниями на этикетках.

Среды с антибиотиками для выделения шигелл

Питательные среды с антибиотиками готовят путем добавления соответствующих препаратов антибиотиков к среде Плоскирева или ЭМС-агару. При выборе антибиотика исходят из результатов определения чувствительности к антибиотикам шигелл, выделяемых в данной местности. Подробности приготовления питательных сред с антибиотиками - см. "Методические рекомендации по применению селективно-дифференциальных сред с антибиотиками для выделения шигелл", МЗ СССР, 1974. Антибиотики могут быть также введены в среду путем диффузии их из вкладываемых под питательную среду в чашке Петри полосок фильтровальной бумаги, пропитанных растворами соответствующих антибиотиков ("метод подосок"). Полоски размером 4 х 0,5 см готовят из фильтровальной бумаги, укладывают "ребром" по 200 штук в чашки Петри и стерилизуют в автоклаве при 121 °C 30 минут, затем подсушивают и пропитывают растворами антибиотиков (левомицетин и тетрациклин в концентрациях 250 мкг/мл, стрептомицин - 500 мкг/мл). Могут быть использованы и другие антибиотики. На смачивание 200 полосок расходуют 12,5 мл раствора антибиотика. Пропитанные раствором антибиотика полоски подсушивают при 37 °C 18 - 20 часов. Готовые полоски хранят в банках с притертыми пробками в холодильнике не более 3-х месяцев.

Среда "Эт-2"

(для выделения эдвардсиелл)

Состав: Экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) - 20 г

Маннит - 10 г

Глюкоза - 2,75 г

L-лизин - 5 г

или

DL-лизин - 10 г

Желчные соли (по Олькеницкому) - 2,5 г

Розоловая кислота (5-процентный спиртовой раствор) - 2 мл

Железо (III) - аммоний цитрат (смесь солей 1:1) - 0,8 г

а) Железо (III) цитрат (FeC H O)

6 5 7

б) Аммоний цитрат /(NH) C H O /

4 3 6 5 7

Натрий тиосульфат (Na S O х 5H O) - 6,8 г

2 2 3 2

Агар - 25 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: в 20 мл воды растворяют тиосульфат натрия и смесь цитратов в указанных количествах. Все остальные ингредиенты растворяют в воде при подогревании в водяной бане до полного расплавления агара и добавляют приготовленный раствор солей, затем среду фильтруют, устанавливают pH 6,9 - 7,1. Стерилизуют при 112 °C 30 минут, разливают в чашки Петри.

3.4. Среды для первичной идентификации

Агар Клиглера

Коммерческая сухая среда готовится в соответствии с указаниями на этикетке препарата. Готовая к употреблению среда имеет красновато-бурый или оранжево-красный цвет, при скашивании следует оставлять столбик высотой 2 - 2,5 см.

Трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому

Состав: Агар питательный сухой - 25 г

Лактоза - 10 г

Сахароза - 10 г

Глюкоза - 1 г

Аммоний-железо (II) сульфат

/(FeSO х (NH) SO х 6H O/ - 0,2 г

4 4 2 4 2

Натрия тиосульфат (Na S O х 5H O) - 0,3 г

2 2 3 2

Мочевина - 10 г

Феноловый красный (0,4-процентный водный р-р) - 4 мл

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: соли предварительно растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании на водяной бане. Сухой питательный агар расплавляют в оставшемся объеме воды при нагревании и помешивании. Затем все ингредиенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают pH 7,2 - 7,4. Добавляют индикатор, хорошо перемешивают, разливают в пробирки по 6 - 7 мл. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 минут. Скашивают, оставляя столбик 2 - 2,5 см. Готовая среда бледно-розового цвета.

3.5. Среды для биохимической дифференциации

Цитратный агар Симонса

Коммерческая сухая среда готовится согласно указаниям на этикетке препарата. Среду разливают по 5 - 7 мл, при скашивании после стерилизации которых оставляют столбик 2 - 2,5 см.

Ацетатный агар

Коммерческая сухая среда, готовят согласно указаниям на этикетке препарата.

Цитратный агар Кристенсена

Коммерческая сухая среда, готовят в соответствии с указаниями на этикетке препарата.

Среда с малонатом

Состав: Дрожжевой экстракт жидкий или - 30 мл

Экстракт сухой - 1 г

Аммоний сульфат (NH) SO - 0,2 г

4 2 4

Калий дигидрофосфат (KH PO) - 0,4 г

2 4

Калий гидрофосфат (K HPO) - 0,6 г

2 4

Натрий хлорид (NaCl) - 2 г

Натрий малонат (CH COOHCOONa) - 3 г

Глюкоза - 0,25 г

Бромтимоловый синий (0,2-процентный водный раствор) - 12 мл

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: в кипящей воде растворяют ингредиенты в указанной последовательности. После добавления каждого реактива среду доводят до кипения, фильтруют, доводят до первоначального объема, охлаждают и устанавливают pH 6,7, добавляют индикатор, разливают в серологические пробирки по 2 мл, стерилизуют при 112 °C 30 минут или при 121 °C 10 минут. Готовая среда имеет бледно-оливковый цвет.

Агар с фенилаланином

Состав: Дрожжевой экстракт жидкий - 100 мл

или экстракт сухой - 3 г

Натрий хлорид (NaCl) - 5 г

Натрий гидрофосфат (Na HPO) - 1 г

2 4

L-фенилаланин - 1 г

или

DL-фенилаланин - 2 г

Агар - 12 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: дрожжевой экстракт вносят в холодную воду, нагревают ее, затем последовательно добавляют остальные ингредиенты и кипятят до полного расплавления агара (5 - 10 мин.), фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают по 2 - 3 мл в агглютинационные пробирки. pH среды должен быть 7,0 - 7,2. Стерилизуют при 112 °C 30 минут и охлаждают в скошенном положении.

Готовая среда не окрашена.

<...> фенилаланина.

Реактив: 10-процентный водный раствор железа (III) хлорида - FeCl.

Хранят при 4 - 6 °C без доступа света.

Среда с мочевиной по Кристенсену

Состав: Пептон - 1 г

Натрий хлорид (NaCl) - 5 г

Калий дигидрофосфат (K HPO) - 2 г

2 4

Агар - 20 г

Глюкоза - 1 г

Феноловый красный (0,2-процентный раствор) - 6 мл

Мочевина (20-процентный раствор) - 100 мл

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: пептон, соли и агар растворяют при нагревании, устанавливают pH, фильтруют и стерилизуют при 115 °C 20 минут. Затем добавляют глюкозу и индикатор, стерилизуют текучим паром 1 час, охлаждают до 50 - 55 °C. Раствор мочевины после стерилизации фильтрованием через фильтр Зейтца асептически добавляют к основе <*>. Готовую среду асептически разливают в стерильные пробирки и охлаждают в скошенном положении.

--------------------------------

<*> Возможно использование 50-процентного водного раствора мочевины, выдержанного 2 - 3 суток для "самостерилизации", и добавление к среде из расчета конечного содержания мочевины в среде 2%.

Среда с мочевиной по Преусу

Состав: Бульон Хоттингера - 1000 мл

Агар - 15 г

Глюкоза - 5 г

Мочевина (50-процентный водный раствор) - 20 мл

Бромтимоловый синий (0,2-процентный водный раствор) - 12 мл

Приготовление: агар расплавляют в бульоне при подогревании, фильтруют, устанавливают pH 6,9 - 7,0. Стерилизуют при 121 °C 20 минут. К стерильному питательному агару добавляют глюкозу, мочевину, индикатор. Стерилизуют текучим паром однократно 15 минут, после чего скашивают. Цвет готовой среды оливковый.

Среда Кларка

Состав: Пептон - 5 г

Калий гидрофосфат (K HPO) - 5 г

2 4

Глюкоза - 5 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: ингредиенты растворяют в воде, кипятят 2 - 3 мин., фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают pH 6,9 - 7,0, разливают в пробирки. Стерилизуют при 112 °C 20 минут или 3 дня текучим паром по 20 минут.

Среды с углеводами <*>

--------------------------------

<*> Выпускаются коммерческие сухие среды с углеводами (глюкозой, лактозой, мальтозой, сахарозой и маннитом).

Состав: Пептон - 10 г

Натрий хлорид (NaCl) - 5 г

Индикатор Андреде - 10 мл

Углевод - 5 или 10 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Примечание: 1) в качестве индикатора pH могут быть использованы растворы бромтимолового синего, фенолового красного или бромкрезолового пурпурного; 2) для специальных целей среду с лактозой готовят с большим содержанием сахара (2 - 10%); 3) к средам может быть добавлен агар (0,2 - 0,4%).

Приготовление: пептон растворяют в воде при подогревании, добавляют хлорид натрия и индикатор, фильтруют, устанавливают pH 7,1 - 7,2, стерилизуют при 121 °C 15 минут. К стерильной основе добавляют соответствующий углевод. Лактозу, глюкозу, маннит или сахарозу добавляют в количестве 1%, а рамнозу, ксилозу, мальтозу, арабинозу, салицин, трегалозу, рафинозу, целлобиозу, дульцит, сорбит, адонит или глицерин - 0,5%. Среду разливают в стерильные пробирки по 3 - 4 мл, в пробирки с глюкозой помещают поплавки (перевернутые бродильные пробирки Дюрхема). Стерилизуют при 110 °C 30 минут или дробно текучим паром (2 дня подряд по 30 минут).

Среда для определения индолообразования

Возможно использование: а) бульона на триптическом переваре казеина

(1,2 - 1,4% аминного азота);

б) бульона на триптическом переваре Хоттингера

(1,2 - 1,4% аминного азота);

в) 2-процентной пептонной воды;

г) 1-процентной пептонной воды с добавлением

0,3% L-триптофана;

д) полужидкого агара, приготовленного на

бульоне Хоттингера.

Приготовление всех названных сред общеизвестно.

Среды с аминокислотами - лизином, орнитином и аргинином

Состав: Пептон - 5 г

Дрожжевой экстракт - 3 г

или

Аутолизат дрожжей - 12 - 15 мл

Глюкоза - 1 г

Бромкрезоловый - пурпурный (1,6-процентный

спиртовой раствор) - 0,6 мл

Крезоловый красный (0,1-процентный

спиртовой раствор) - 5 мл

L-аминокислота - 10 г

или

DL-аминокислота - 20 г

Указанный в оригинальной прописи индикатор pH может быть заменен на бромтимоловый синий (1 мл 1,6-процентного спиртового раствора).

Вместо дрожжевого экстракта или аутолизата дрожжей можно брать 400 мл мясной воды, соответственно уменьшив объем дистиллированной воды до 600 мл.

Приготовление: в воде растворяют белковую питательную основу и глюкозу. Устанавливают pH 6,0 - 6,1. Затем среду делят на 4 равные части. В каждую из трех порций вносят одну из аминокислот (лизин, орнитин или аргинин) в количестве, зависящем от кристаллизационной формы реактива (L или DL). В последнюю порцию питательной основы аминокислот не добавляют, оставляя ее в качестве контрольной. Среды кипятят 5 - 10 минут и вновь устанавливают pH 6,0 - 6,1. Во все порции вносят раствор индикатора, перемешивают, разливают в агглютинационные пробирки по 2 - 3 мл. Стерилизуют при 110 °C 30 минут.

Среды с органическими кислотами: D-, L- и i-тартрат, мукат

Состав:

Основа. Пептон - 10 г

Натрий гидроокись (NaOH) 0,1 N раствор - 3,5 мл

Бромтимоловый синий (0,2-процентный водный раствор) - 12 мл

Вода дистиллированная - 1000 мл

Органические кислоты.

D-тартрат (правовращающая соль винной кислоты) - 10 г

L-тартрат (левовращающая соль винной кислоты) - 5 г

i (или мезо)-тартрат (оптически

инертная соль винной кислоты) - 5 г

Мукат - 10 г

Приготовление: готовят основу среды, стерилизуют при 120 °C 15 минут, добавляют одну из органических кислот, устанавливают pH 7,4, асептически разливают в стерильные пробирки по 5 - 6 мл и стерилизуют текучим паром 20 минут.

Готовить среду можно иначе: к указанной основе присоединить одну из органических кислот, установить pH 7,4, разлить в пробирки и стерилизовать при 112 °C 20 минут.

Глицерино-фуксиновый бульон Штерна

Состав: Бульон Хоттингера стерильный, pH 8,0 - 1000 мл

Фуксин основной, насыщенный спиртовой раствор

(10-процентный) - 2,5 мл

Натрий сульфит (Na SO)

2 3

(10-процентный водный раствор) - 16,6 мл

Глицерин нейтральный - 10 мл

Приготовление: к бульону добавляют спиртовой раствор фуксина, свежеприготовленный 10-процентный водный раствор сульфита натрия и глицерин, хорошо смешивают, разливают в пробирки по 6 - 7 мл, стерилизуют при 112 °C 15 минут. Хранить среду можно в холодильнике не более 14 дней.

Среда Ворфаля - Фергюсона

Состав: Натрий хлорид (NaCl) - 2 г

Калий сульфат (K SO) - 1 г

2 4

Магний сульфат (MgSO х 7H O) - 0,25 г

4 2

Сахароза - 20 г

Дрожжевой экстракт сухой - 2 г

или

Дрожжевой экстракт жидкий - 88 мл

Агар - 15 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Примечание: возможно применение жидкой среды (без добавления агара) согласно оригинальной прописи.

Приготовление: агар расплавляют в теплой воде, добавляют остальные ингредиенты, растворенные в малых количествах воды, хорошо перемешивают, фильтруют, pH не устанавливают, разливают в колбы или флаконы, стерилизуют при 121 °C 15 минут. Перед употреблением разливают в чашки Петри.

3.6. Полужидкий агар для определения подвижности

Состав: Натрий хлорид (NaCl) - 5 г

Гидролизат Хоттингера - 120 - 150 мл

Агар - 3 - 4 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: гидролизат Хоттингера разводят водой до содержания в среде 1,2 - 1,4% аминного азота, добавляют хлорид натрия, устанавливают pH 7,2 - 7,4, добавляют агар и полностью расплавляют его, подогревая среду при постоянном помешивании. Затем фильтруют в горячем состоянии через тканевый фильтр, проверяют прозрачность (визуально) и в случае необходимости осветляют с помощью яичного белка или путем отстаивания в узких сосудах. Среду разливают по 5 мл в пробирки при 121 °C 30 минут. Охлаждают в вертикальном положении.

Примечание: среда может быть одновременно использована для определения индолообразования.

3.7. Среды и реактивы для дифференциации энтеробактерий

от представителей других семейств

Среда для теста на окисление - ферментацию (OF-тест)

Состав: Пептон - 2 г

Натрий хлорид (NaCl) - 5 г

Калий гидрофосфат (K HPO) - 0,3 г

2 4

Агар - 3 г

Бромтимоловый синий (1-процентный водный раствор) - 3 мл

Глюкоза - 10 г

Вода дистиллированная - 1000 мл

Приготовление: среда требует особо тщательного приготовления и использования проверенных ингредиентов. Все вещества, входящие в состав среды, растворяют при подогревании в водяной бане, фильтруют, разливают в пробирки по 5 - 6 мл и стерилизуют при 118 °C 10 минут. Готовая среда имеет pH 7,1 - 7,2.

Другой способ приготовления: основу (все компоненты, кроме глюкозы) готовят, как указано выше, затем разливают в пробирки мерно по 5 мл и стерилизуют при 121 °C в течение 15 минут. Глюкозу в виде 10-процентного водного раствора подвергают стерилизующей фильтрации (через фильтры Зейтца или др.) и добавляют асептически по 0,5 мл в каждую пробирку со стерильной основой, используют после тщательного перемешивания. Допустимо хранение при 4 °C 2 - 3 дня.

Среда с KNO для определения редукции нитратов