Вызываемых энтеробактериями 1 страница

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ,

ВЫЗЫВАЕМЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЯМИ

Методические указания разработаны:

Центральным Ордена Ленина институтом усовершенствования врачей Минздрава СССР;

Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии Минздрава СССР;

Центральным научно-исследовательским институтом вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова Минздрава СССР;

санитарно-эпидемиологической станцией Московской железной дороги.

ВВЕДЕНИЕ

За последние 15 - 20 лет в научных и практических учреждениях нашей страны предложены и апробированы эффективные и научно обоснованные методы выделения и идентификации энтеробактерий. Разработаны и частично внедрены в производство новые диагностические препараты: питательные среды, сыворотки, высокоспецифические диагностикумы, системы для ускоренной идентификации, препараты бактериофагов и некоторые другие реагенты.

В представленный документ включены методы классической бактериологической диагностики заболеваний, вызываемых энтеробактериями, ускоренные методы идентификации и выявления антигенов энтеробактерий, а также методы серологической диагностики соответствующих заболеваний и сведения о приготовлении ряда необходимых питательных сред.

"Методические указания..." преследуют цель унификации методов проведения лабораторной диагностики с применением современных приемов, позволяющих идентифицировать любые из известных в данное время представителей энтеробактерий <*>. Внедрение в практику данных Методических указаний будет способствовать повышению уровня микробиологической диагностики в стране.

--------------------------------

<*> "Инструкцию по микробиологической диагностике кишечных заболеваний, вызванных шигеллами, сальмонеллами и энтеропатогенными кишечными палочками", утв. нач. ГСЭУ Минздрава СССР 11.05.66 N 629-66, считать утратившей силу.

В "Методических указаниях..." представлены также разделы по определению эпидемиологических маркеров штаммов энтеробактерий.

Принятые в тексте сокращения:

УПЭ - условно патогенные энтеробактерии;

ЭПЭ - энтеропатогенные эшерихии;

ЭМС - агар с эозин-метиленовым синим;

ВСА - висмут-сульфит агар;

ИХН - изотонический раствор хлорида натрия;

СПА - слабощелочной питательный агар;

СПБ - слабощелочной питательный бульон;

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации.

Общее примечание.

1. Идентификацию выделенных энтеробактерий по биохимическим свойствам до уровня рода и вида проводят во всех бактериологических лабораториях санитарно-эпидемиологических станций и лечебно-профилактических учреждений.

2. Серологическую идентификацию шигелл до уровня сероваров (и подсероваров), сальмонелл - до сероваров, энтеропатогенных эшерихий - до OK-серогрупп проводят во всех указанных лабораториях.

3. Исследования с целью серологической диагностики заболеваний (бактерионосительства) проводят по указанию клинициста или эпидемиолога во всех указанных лабораториях.

4. Определение эпидемиологических маркеров штаммов упомянутых патогенных энтеробактерий - биоваров, сероваров (энтеропатогенных эшерихий), фаговаров, колициногеноваров, колициноваров - проводят по эпидемиологическим показаниям и наличии соответствующих условий в лабораториях республиканских, краевых, областных, городских (в городах с районным делением) санитарно-эпидемиологических станций.

5. Определение сероваров и биоваров условно патогенных энтеробактерий проводят по эпидемиологическим показаниям в лабораториях, перечисленных в п. 4.

1. КЛАССИФИКАЦИЯ И НОМЕНКЛАТУРА ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ

В настоящее время определение таксономических категорий в бактериологии основано на сочетании морфологических, тинкториальных, биохимических, генетических и других биологических характеристик.

Классификация и номенклатура энтеробактерий в данных "Методических указаниях" приняты в соответствии с широко известным 8-м изданием Bergey's Manual (1974) <*>.

--------------------------------

<*> На русском языке издан его сокращенный вариант - Краткий определитель бактерий Берги (1980).

С целью унификации и правильности написания названий бактерий Международным кодексом номенклатуры бактерий (1975) сформулированы определенные правила. В частности, наименование бактерий следует писать только по-латыни, при этом род - с заглавной буквы, а видовой эпитет - со строчной. Например: Salmonella typhi, или сокращенно S. typhi. Рекомендовано также при внутривидовой дифференциации употреблять термины фаговар вместо фаготип, серовар вместо серотип и т.д.

Семейство Enterobacteriaceae объединяет обширную группу грамотрицательных палочек, подвижных или неподвижных, образующих или не образующих капсулы, некислотоустойчивых, не образующих спор, аэробов или факультативных анаэробов. Они образуют кислоту при ферментации глюкозы, цитохромоксидазоотрицательны, восстанавливают нитраты до нитритов (кроме некоторых штаммов Erwinia). Характеристики отдельных родов и видов приведены далее.

В таблице 1 представлены основные таксономические категории и номенклатура энтеробактерий.

Таблица 1

КЛАССИФИКАЦИЯ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE

(ПО BERGEY'S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY, 1974)

┌─────────────┬─────────────────┬────┬────────────────────────┬─────────────┐

│ Т. лба │ Род │Под-│ Вид (серовар) │ Группа │

│ │ │род │ │ (особое │

│ │ │ │ │обозначение) │

├─────────────┼─────────────────┼────┼────────────────────────┼─────────────┤

│I. │I. Escherichieae │ │1. E. coli │ │

│Escherichieae│II. Edwardsiella │ │1. E. tarda │ │

│ │III. Citrobacter │ │1. C. freundii │ │

│ │ │ │2. C. intermedius │ │

│ │IV. Salmonella │I │ │ │

│ │ │II │ │ │

│ │ │III │ │ │

│ │ │IV │ │ │

│ │V. Shigella │ │1. B. dysenteriae │ │

│ │ │ │2. B. flexneri │ │

│ │ │ │3. S. boydii │ │

│ │ │ │4. S. sonnei │ │

├─────────────┼─────────────────┼────┼────────────────────────┼─────────────┤

│II. │VI. Klebsiella │ │1. K. pneumoniae │ │

│Klebsielleae │ │ │2. K. ozaenae │ │

│ │ │ │3. K. rhinoscleromatia │ │

│ │VII. Enterobacter│ │1. E. cloacae │ │

│ │ │ │2. E. aerogenas │ │

│ │VIII. Hafnia │ │1. H. alvei │ │

│ │IX. Serratia │ │1. S. maroescens │ │

├─────────────┼─────────────────┼────┼────────────────────────┼─────────────┤

│III. Protoeae│X. Proteus │ │1. P. vulgaris │ │

│ │ │ │2. P. mirabilis │ │

│ │ │ │3. P. morganii │ │

│ │ │ │4. P. rettgari │ │

│ │ │ │5. P. inconstans │ │

│ │ │ │(Providencia) │ │

├─────────────┼─────────────────┼────┼────────────────────────┼─────────────┤

│IV. │XI. Yersinia │ │1. Y. pestis │ │

│Yersiuieae │ │ │2. Y. pseudotuberculosis│ │

│ │ │ │3. Y. enterocolitica │ │

├─────────────┼─────────────────┼────┼────────────────────────┼─────────────┤

│V. Erwinieae │XII. Erwinia │ │ │1. Axylovora │

│ │ │ │ │2. Herbicola │

│ │ │ │ │3. Carotovora│

└─────────────┴─────────────────┴────┴────────────────────────┴─────────────┘

Классификация семейства Enterobateriaceae, предложенная Юингом (W. Ewing, 1967 - 1972) и имеющая признание до настоящего времени, по некоторым позициям расходится с Определителем бактерий Берги. Поэтому считаем необходимым указать на наиболее существенные расхождения.

Тек, в Определителе Берги не упоминается Klebsiella oxytoca, фактически представляющая биовар K. pneumoniae, отличающийся по тестам на индол и желатин. В классификации Юинга K. oxytoca рассматривают как самостоятельный вид. В роду Serratia по Берги имеется единственный вид - S. maroescens, а Юингом в этот род включены еще два вида: S. liquefaciens и позднее S. rubideae. У Берги имеется вид Proteus inconstans, по Юингу это род Providencia. В Определителе Берги в род Citrobacter включены два вида: C. freundii и C. intermedius. У Юинга имеется третий вид - C. diversus, который является биоваром C. intermedius.

Эти сопоставления приведены лишь для справок, так как в "Методических указаниях..." принята классификация по Берги.

2. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА

Бактериологическому исследованию на наличие энтеробактерий может быть подвергнут различный материал, получаемый от людей; показания к его исследованию, правила взятия, подготовки к посеву и выбор питательных сред различны. Однако, начиная с отбора колоний на пластинчатых средах, последующие этапы бактериологического исследования (определение родовой, видовой принадлежности выделенных культур, их серологических характеристик и др.) идентичны (см. схему 1).

СХЕМА 1

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ НА ЭНТЕРОБАКТЕРИИ

┌────────────────────────────────┐

│ Исследуемый материал <*> │

├────────────────────────────────┤

┌────┤Подготовка для посева и посев на├────┐

\/ └────────────────────────────────┘ \/

I день ┌──────────────────┐ ┌────────────────────┐

│Пластинчатые среды│ │Среды обогащения для│

└──────┬───────────┘ │испражнений, крови и│

18 - 20 │ /\ │ других материалов │

часов │ │ └─────┬──────────────┘

│ └──────────────────────────────────────────┘ 18 - 20 часов,

\/ иногда более

II ┌───────────────────────────┬──────────────────────────────────────┐

день │Выделение колоний на среды │ При поисках ЭПЭ отбор колоний под │

│для первичной идентификации│ контролем реакции агглютинации на │

│ │стекле с поливалентной сывороткой OKA,│

│ │ при наличии агглютинации посев на │

│ │среду для первичной идентификации и на│

│ │ скошенный агар │

└──────┬────────────────────┴──────────────────────────────────────┘

18 - 20 │

часов \/

III ┌──────────────────────────┐┌──────────────────────────────────────┐

день │Учет результатов первичной││Ориентировочные пробы с поливалентными│

│ идентификации, подбор ││ агглютинирующими сыворотками, │

│ необходимого минимума ││ бактериофагами │

│ дифференциальных тестов │└───────────────────┬──────────────────┘

│ для определения рода и │<───────────────────┘

│посевы на соответствующие │

│ среды │

└───────────────┬──────────┘

18 - 20 часов, │

иногда более │

\/

IV ┌──────────────────────────┐ ┌───────────────────────────────────┐

день │ Заключение о родовой, а │ │ Серологическая идентификация с │

│для ряда энтеробактерий и │<──┤поливалентными родовыми, видовыми и│

│ о видовой принадлежности │ │ др. агглютинирующими сыворотками к│

├──────────────────────────┤ │ шигеллам, сальмонеллам и │

│ Дополнительные тесты для │ │ энтеропатогенным эшерихиям │

│ идентификации видов │ └───────────────────────────────────┘

│ (биоваров) для некоторых ├───────────────────────┐

│ энтеробактерий │ │

└───────────────┬──────────┘ │

18 - 20 часов │ │

\/ \/

V день ┌──────────────────────────┐ ┌───────────────────────────────────┐

│ Определение видов │ │ Определение эпидмаркеров (при │

│ (биоваров). Выдача │ │ наличии показаний) │

│ письменного заключения │ └───────────────────────────────────┘

│ (ответа) │

└──────────────────────────┘

--------------------------------

<*> Для некоторых материалов (мокрота, спинномозговая жидкость, гной и т.п.) целесообразна предварительная бактериоскопия.

2.1. Материал для исследования

Обоснованные показания к проведению бактериологического исследования того или иного материала и правильное его взятие в значительной мере определяют эффективность действий бактериолога. В определении характера подлежащих исследованию материалов, сроков их взятия ведущее значение принадлежит врачам-клиницистам и эпидемиологам. Основные показания к исследованию различных клинических материалов приведены в табл. 2.

Таблица 2

ПОКАЗАНИЯ К БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ

РАЗЛИЧНОГО КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

┌──────────────┬──────────────────────────────────────┬───────────────────┐

│ Исследуемый │ Показания к исследованию │ Сроки взятия проб │

│ материал │ │ │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Испражнения │Ранняя диагностика острых кишечных │С начала │

│ │заболеваний, в том числе с целью │заболевания. │

│ │подтверждения диагноза при клиническом│Период │

│ │диагнозе брюшного тифа, паратифов. │реконвалесценции │

│ │Контроль при выписке из лечебного │ │

│ │учреждения, подтверждение клинического│ │

│ │диагноза. │ │

│ │По эпидемиологическим показаниям, │По усмотрению │

│ │профилактические обследования │эпидемиолога и │

│ │декретированных контингентов │санитарного врача │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Кровь │Ранняя диагностика брюшного тифа, │С начала │

│ │паратифов │заболевания │

│ │Лихорадочные состояния неустановленной│По указанию │

│ │этиологии │клинициста │

│ │Клиническая картина сепсиса │По указанию │

│ │ │клинициста │

│ │Ранняя диагностика сальмонеллезов │По усмотрению │

│ │ │клинициста и │

│ │ │эпидемиолога │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Моча │При клиническом диагнозе брюшного тифа│С конца 2-ой недели│

│ │и паратифов с целью подтверждения │ │

│ │диагноза │ │

│ │Выявление бактерионосителей │По указанию │

│ │ │эпидемиолога │

│ │Острые и хронические гнойно-воспали- │По усмотрению │

│ │тельные заболевания мочевыводящей │клинициста │

│ │системы неустановленной этиологии │ │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Желчь и │Выявление носителей сальмонелл │По указанию │

│дуоденальное │ │эпидемиолога │

│содержимое │Острые и хронические гнойно-воспали- │По усмотрению │

│ │тельные заболевания мочевыводящей │клинициста │

│ │системы неустановленной этиологии │ │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Рвотные массы │Клинические проявления гастроэнтерита │В остром периоде │

│и промывные │ │ │

│воды │ │ │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤