Вызываемых энтеробактериями 2 страница

│Соскоб розеол │Для подтверждения клинического │При наличии розеол │

│ │диагноза брюшного тифа и паратифов как│ │

│ │вспомогательный метод (при отсутствии │ │

│ │гемо-, копро- и уринокультур) │ │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Гной, пунктаты│Наличие местных гнойно-воспалительных │По указанию │

│органов, │процессов в организме, осложняющих │клинициста │

│экссудат │течение основного заболевания или в │ │

│ │отсутствие такового │ │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Спинномозговая│Менингеальный синдром при заболеваниях│По указанию │

│жидкость │неустановленной этиологии │клинициста │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Отделяемое │Наличие гнойно-воспалительных │По указанию │

│ран, шейки │процессов в соответствующих органах │клинициста │

│матки, мокро- │ │ │

│та, слизь из │ │ │

│зева, носа, │ │ │

│уха │ │ │

├──────────────┼──────────────────────────────────────┼───────────────────┤

│Секционный │При необходимости подтверждения │В первые 3 - 6 │

│материал │прижизненного клинического диагноза, │часов после │

│ │ретроспективная диагностика при │установления факта │

│ │отсутствии прижизненного диагноза │смерти │

└──────────────┴──────────────────────────────────────┴───────────────────┘

Повышению высеваемости, в частности патогенных энтеробактерий, способствует повторное (до 3 - 4 раз) исследование соответствующего материала.

Общим требованием к процедуре отбора проб клинических материалов является обеспечение условий, исключающих контаминацию (загрязнение) материала микроорганизмами из смежных областей тела и окружающей среды. Материал для бактериологического исследования целесообразно брать до начала антибиотико-(химио-)терапии. Судна, горшки и другие емкости для сбора испражнений должны быть тщательно вымыты и лишены следов дезинфицирующих средств.

Материал собирают в стерильную посуду, снабжают наклейкой с указанием фамилии обследуемого и наименования материала. В сопроводительном документе указывают учреждение, направляющее материал, анкетные данные обследуемого: фамилия, имя, отчество, возраст, место работы и должность (для детей, посещающих детские учреждения, указывают название соответствующего детского учреждения), дату заболевания, диагноз или другие показания для обследования; наименование материала, дату и час взятия пробы, цель исследования, первичность или повторность исследования (при повторных исследованиях необходимо указать дату и результат первичного обследования), фамилию и должность лица, направляющего материал.

Испражнения собирают сразу после дефекации из судна, горшка, специального лотка или с пеленки с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли или деревянного шпателя. При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, хлопья, гной) их следует включить в отбираемую пробу. Испражнения можно получить непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных тампонов, ватных или ватно-марлевых, укрепленных на металлической петле или деревянной палочке, а также применяя для извлечения фекалий специальные проволочные петли.

При профилактических обследованиях здоровых лиц на носительство

сальмонелл возможно применение солевого слабительного (25 - 30 г магнезии

сульфата - MgSO) в теплом виде и предпочтительно накануне дня взятия

испражнений на исследование.

Испражнения, не помещенные в консервант, суспендируют в ИХН в соотношении 1:5 или 1:10 и засевают не позднее 2 часов после взятия. При использовании консервантов оптимальны те же сроки, но материал пригоден для исследования еще в течение 12 - 24 часов. Объем испражнений, вносимых в консервант, не должен превышать 1/3 его объема, после внесения в пробирку испражнения следует перемешать. Материал, помещенный в консервант, сохраняют до начала исследования при 4 - 6 °C.

В качестве консервантов (транспортных сред) используют забуференный глицериновый, фосфатно-буферный консерванты (pH 8,0), а также ИХН. При исследованиях на наличие иерсиний глицериновый консервант непригоден. По возможности исследуемый материал сохраняют при 4 - 6 °C вплоть до учета результата посевов на пластинчатые среды, а при целенаправленном исследовании на иерсинии - до 14 дней (с целью накопления).

Кровь для исследования берут стерильным шприцом с соблюдением правил асептики из локтевой вены в объеме 2 - 10 мл (в зависимости от возраста) и засевают у постели больного в соотношении 1:10 во флаконы со средой Рапопорт, 10 - 20-процентным желчным бульоном или в стерильную дистиллированную (водопроводную) воду. Использование сред с желчью предпочтительно. При взятии крови в более поздние сроки и при слабо выраженной клинической картине заболевания объем засеваемой крови увеличивают до 15 - 20 мл, сохраняя то же соотношение крови и питательной среды (1:10). У детей до 1 года кровь берут в доступных количествах из пальца, пятки или мочки уха с соблюдением правил асептики.

При необходимости исследованию могут быть подвергнуты сгустки крови (после отделения сыворотки), доставленной в лабораторию для серологических исследований. Сгусток крови измельчают в пробирке с помощью стеклянной палочки и засевают (в соотношении 1:10) в среду Рапопорт или желчный бульон.

Рвотные массы и промывные воды желудка берут для исследования в объеме

до 100 мл материала. При кислой реакции рвотные массы перед посевом

нейтрализуют 10-процентным раствором питьевой соды (NaHCO). Исследованию

подлежат первые порции промывных вод, полученные без использования при

промывании дезинфицирующих средств (KMnO или др.); перед посевом промывные

воды центрифугируют и засевают их осадок.

Соскоб розеол исследуют при наличии хорошо выраженных розеол. Участок кожи над ними обрабатывают спиртом, промывают стерильным ИХН, осушают стерильной марлей и подвергают скарификации. На поврежденную кожу наносят 1 - 2 капли желчного бульона или ИХН, затем собирают материал пастеровской пипеткой или небольшим кусочком стерильной ваты и опускают в пробирку с желчным бульоном.

Желчь (дуоденальное содержимое). Возможность проведения дуоденального зондирования определяет врач-клицинист. Материал собирают в отдельные стерильные пробирки, порции A, B, C, соответственно - дуоденальное содержимое, пузырную желчь и желчь из желчных протоков. Дуоденальное содержимое и желчь имеют зеленовато-желтый цвет и щелочную реакцию (последнюю проверяют индикаторными бумажками). Кислая реакция, белесоватый оттенок жидкости, наличие хлопьев свидетельствуют о примеси желудочного сока, такой материал непригоден для исследования на наличие энтеробактерий.

Моча. После обмывания наружных половых органов и спускания начальных порций мочи собирают 20 - 30 мл мочи в стерильную баночку (флакон). Доставленную в лабораторию мочу перед посевом центрифугируют и засевают осадок или используют для посева нативную мочу.

Гной, пунктаты органов, экссудат получают с помощью стерильного шприца или ватного (марлевого) тампона, при возможности сразу засевают на соответствующие питательные среды или пересылают в стерильных пробирках в лабораторию.

Слизь из зева, носа, уха, отделяемое шейки матки забирают с помощью стерильного ватного (марлевого) тампона, помещают в пробирки с ИХН, с СПБ или без них и пересылают в лабораторию.

Операционный материал (кусочки органов и тканей, извлекаемые при оперативных вмешательствах, содержимое удаленного червеобразного отростка, желчного, мочевого пузыря и др.) помещают в стерильные стеклянные баночки или пробирки, отдельные для каждого материала, и доставляют в лабораторию, следуя общим правилам.

Спинномозговую жидкость получают при люмбальной пункции в объеме 3 - 5 мл и помещают в стерильную пробирку. При транспортировке предохраняют от охлаждения (может быть использован термос).

Секционный материал берут на месте вскрытия, соблюдая правила асептики. В лабораторию направляют участки кишки длиной 8 - 10 см, с целью получения которых с обоих концов намеченного участка накладывают двойные лигатуры и разрезают кишку между этими лигатурами. Кровь из сердца или синуса твердой мозговой оболочки и желчь из желчного пузыря берут в объеме 3 - 5 мл с помощью пастеровской пипетки. Место прободения пипеткой стенки соответствующего органа предварительно прижигают шпателем. Кусочки тканей и органов вырезают из глубины стерильным скальпелем или ножницами также после предварительного обжигания поверхности. Каждый образец органа, ткани и т.п. помещают раздельно в стерильную посуду. Кусочки тканей и органов могут быть использованы для посева на месте изъятия органов методом отпечатков или после получения суспензии их в ИХН или СПБ путем растирания в ступке.

2.2. Посев материала и выделение чистой культуры

Для выделения энтеробактерий в чистой культуре требуется соблюдение ряда условий: максимально ранний посев взятого материала; подбор соответствующих питательных сред для первичного посева; техника выполнения посева должна обеспечить рост изолированных колоний. Для культивирования посевов используют оптимальный по температурным условиям и сроку инкубации режим. Подлежащую изучению колонию снимают бактериологической петлей, прикасаясь к поверхности колонии в центре и не затрагивая соседние участки среды. Недопустимо охлаждать петлю прикосновением к поверхности питательной среды, визуально свободной от микробного роста, на ней могут быть невидимые микроколонии.

Выбор питательных сред определяют, исходя из характера исследуемого материала (испражнения, кровь и т.д.) и представления о возможном содержании в нем тех или иных энтеробактерий и их ассоциаций (табл. 3). При этом учитывают и данные сопроводительной документации (цель исследования, диагноз, эпидемическая ситуация и др.). Наряду с обоснованным выбором важно качественное приготовление сред, строгое соблюдение указаний на этикетках и в наставлениях к коммерческим препаратам или в рецептурных прописях. Пластинчатые среды подсушивают, на их поверхности не должна оставаться конденсационная жидкость. В набор сред должны быть включены среды как для выделения патогенных энтеробактерий, так и обеспечивающие возможность выделения УПЭ. Исключение возможно лишь при целенаправленных исследованиях в особых ситуациях.

Таблица 3

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ПЕРВИЧНОГО ПОСЕВА

В СООТВЕТСТВИИ С ИССЛЕДУЕМЫМ МАТЕРИАЛОМ

┌────────────┬──────────────────────────────┬────────────────────────────────────────────┬──────────────────────────────────────────┐

│Исследуемый │Энтеробактерии, которые могут │ Плотные среды для выделения │ Среды (бульоны) обогащения │

│ материал │ содержаться в исследуемом ├─────┬────────┬───────┬───┬────┬───────┬────┼────┬─────┬────────┬────────┬──────┬──────┤

│ │ материале │Плос-│висмут- │с анти-│ЭМС│Эндо│по │Эт-2│маг-│селе-│Мюллера │желчный │глю- │буфер-│

│ │ │кире-│сульфит-│биоти- │ │ │методу │ │ние-│нито-│ или │бульон │козный│ная │

│ │ │ва │агар │ками │ │ │подвиж-│ │вая │вая │Кауфмана│ или │бульон│(для │

│ │ │ │ │ │ │ │ного │ │ │ │ │ среда │ │иерси-│

│ │ │ │ │ │ │ │роста │ │ │ │ │Рапопорт│ │ний) │

├────────────┼──────────────────────────────┼─────┼────────┼───────┼───┼────┼───────┼────┼────┼─────┼────────┼────────┼──────┼──────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11 │ 12 │ 13 │ 14 │ 15 │

├────────────┼──────────────────────────────┼─────┼────────┼───────┼───┼────┼───────┼────┼────┼─────┼────────┼────────┼──────┼──────┤

│Испражнения │Shigella │+ │ │+ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Salmonella │+ │+ │ │+ │+ │+ │ │+ │+ │+ │ │ │ │

│ │Escherichia, Enterobacter, │+ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Klebsiella, Hafnia, Serratia, │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Erwinia │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Citrobacter │+ │+ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Proteus │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Y. enterocolitica, │ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │+ │

│ │Y. pseudotuberculosis │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Edwardsiella │ │+ │ │ │ │ │+ │ │ │ │ │ │ │

├────────────┼──────────────────────────────┼─────┼────────┼───────┼───┼────┼───────┼────┼────┼─────┼────────┼────────┼──────┼──────┤

│Кровь │S. dysenteriae 1, Escherichia,│ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Citrobacter, Enterobacter │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │S. typhi, S. paratyphi, │ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │+ │ │ │

│ │S. paratyphi B, редко другие │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │серовары │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Klebsiella │ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │+ │ │

│ │Proteus │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Y. enterocolitica, │ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │+ │

│ │Y. pseudotuberculosis │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

├────────────┼──────────────────────────────┼─────┼────────┼───────┼───┼────┼───────┼────┼────┼─────┼────────┼────────┼──────┼──────┤

│Рвотные │S. sonnei │+ │ │+ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│массы, │Salmonella │+ │+ │ │+ │+ │ │ │+ │+ │+ │ │ │ │

│промывные │Escherichia, Klebsiella, │+ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│воды желудка│Enterobacter, Hafnia │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Citrobacter │+ │+ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Proteus │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

├────────────┼──────────────────────────────┼─────┼────────┼───────┼───┼────┼───────┼────┼────┼─────┼────────┼────────┼──────┼──────┤

│Желчь, │Salmonella │+ │+ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│дуоденальное│Escherichia, Klebsiella, │+ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│содержимое │Enterobacter │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Proteus │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Y. enterocolitica │ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │+ │

├────────────┼──────────────────────────────┼─────┼────────┼───────┼───┼────┼───────┼────┼────┼─────┼────────┼────────┼──────┼──────┤

│Моча │Salmonella │+ │+ │ │+ │+ │ │ │+ │+ │+ │ │ │ │

│ │Escherichia, Klebsiella, │+ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Enterobacter, Hafnia, │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Serratia │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Citrobacter │+ │+ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Proteus │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Y. enterocolitica, │ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │+ │

│ │Y. pseudotuberculosis │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

├────────────┼──────────────────────────────┼─────┼────────┼───────┼───┼────┼───────┼────┼────┼─────┼────────┼────────┼──────┼──────┤

│Гной │Salmonella │+ │+ │ │+ │+ │ │ │+ │+ │+ │ │ │ │

│ │Escherichia, Klebsiella, │+ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Enterobacter │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Citrobacter │+ │+ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Proteus │+ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │Y. enterocolitica, │ │ │ │+ │+ │ │ │ │ │ │ │ │+ │

│ │Y. pseudotuberculosis │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │