Патогенез брюшного тифа - основа выбора исследуемого материала и метода исследования

В течении первой недели заб-ния у всех больных имеется бактериемия, которая затем постепенно прекращается; с конца 1-ой, начала 2-ой нед. возникает защитные р-ции, т.е. образуются специфические антитела, активируется фагоцитоз, но преобладает проявление гуморального иммунитета. Организм освобождается от возбудителей в значительной степени, уменьшается интоксикация, но повышается воспалительный процесс в лимфатическом аппарате тонкого кишечника. Этому способствует вторичный занос в просвет тонкого кишечника возбудителей. Различают 5 периодов в развитии воспалительного процесса: мозговидное набухание, некроз фолликулов, отторжение некротических масс и образование язв, очищение язв, заживление язв. Начиная с конца 2-ой, начала 3-ей нед. возбудители вместе с некротическими массами поступают в просвет тонкой кишки и выделяются с испражнениями, обычно до клинического выздоровления (иногда м.б. хроническое бактерионосительство).

8. Этапы бактериологической диагностики на 1 и 3-й неделе забо­левания и выявления бактерионосителей брюшного тифа (обна­ружение возбудителя). Какие питательные среды применяют на каждом этапе?

На 1-ой нед. заб-ния исследуют кровь с целью выявления возбудителя. Проводится поэтапно: предварительный этап - засевают в колбу со средой Раппопорт (среда помутнела, покраснела); 1-ый этап - делают высев со следы Раппопорт на чашки со средой Эндо с целью получения изолированных колоний (при положительном рез-те на среде Эндо выросли изолированные бесцветные Lac- колонии); затем 2-ой этап – засевают Lас- колонии на комбинированную среду Рессела или Клиглера – уколом в столбик, штрихом по скошенной поверхности среды. Часть колоний засевают на тест-колонии АРI 20Е; на 3-ем этапе проводят идентификацию выделенной культуры. Серологическая идентификация осущ-ся с помощью агглютинирующих адсорбированных сальмонеллезных О- и Н-сывороток.

Со 2-ой нед. заб-ния возможно выделить возбудители также из мочи, желчи. Бактериологическое исследование испражнений отличается: сначала разводят в 10 раз физ. р-ром и далее в соотношении 1:5 засевают на среды, предназначенные для посева загрязненных материалов – селенитовый бульон или среду Мюллера --- затем пересев на чашки со средами Эндо, Плоскирева или висмульт-сульфит агаром. Одновременно с посевом на среды обогощения, пробу испражнений засевают непосрежственно на чашки со средами Плоскирева или висмульт-сульфит агаром (если на них вырастают колонии возбудителя – Lас- на средах Эндо и Плоскирева и черный или коричневый на висмульт-сульфит агаре – отсевают на комбинированные среды Клиглера, Рессела и др., т.е. далее так же как и при исследовании крови).

На 3-ей недели делают повторные высевы.

9. Питательные среды Раппопорта, Эндо, Левина, Рессела, Клиглера: тип среды, состав, назначение, принцип действия.

Среда Раппопорта является средой обогащения и дифференциально-диагностической средой. В ее состав входит: желчный бульон 10%, 2% глюкоза, индикатор (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью; в щелочной среде бесцветный, в кислой – красный). Назначение: для накопления тифо-паратифозных бактерий при посеве крови больного, а также для ориентировочной дифференциации тифо-паратифозных бактерий. Принцип д-я: при росте тифо-паратифозных бактерий из-за ферментации глюкозы происходит диффузное помутнение и покраснение среды. Для паратифозных бактерий, в отличие от брюшно-тифозных, наличие в поплавке газа.

Среда Эндо – дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза, индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний. Принцип д-я основан на способности некоторых микроорганизмов разлагать или не разлагать лактозу (сальмонеллы не разлагают и образуют бесцветные колонии).

Среда Левина является слабо селективной и дифференциально-диагностической. В ее составе МПА, тактоза, индикаторы: эозин и метиленовый синий, калий гидрофосфат. Назначение и принцип д-я см. среду Эндо.

Среда Рессела – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, индикатор (водный голубой и розоловая к-та; в щелочной среде розовая, в кислой – синяя). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выделения чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе и лактозе. Принцип д-я:

Среда Клиглера – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, натрий тиосульфат, железо II сульфат, индикатор – феноловый красный (в щелочной среде – красный, в кислой – желтый). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выявления чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе, лактозе и образования Н2S. Принцип д-я: энтеробактерии, имеющие фермент тиосульфат-редуктазу, восстанавливают тиосульфат в сульфит, при этом выделяется сероводород, который реагирует с железо-сульфатом – в рез-те образуется сульфид железа черного цвета.

10. Серологическая идентификация выделенной чистой культуры с помощью адсорбированных монорецепторных О- и Н- агглю­тинирующих сальмонеллезных сывороток.

Серологическая идентификация проводится в реакции агглютинации на стеке с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, эти сыворотки м.б. 2-х видов: монорецепторными и поливалентными, их получают из видовых иммунных сывороток методом адсорбции антител по Кастеллани.

Серологическая идентификация протекает последовательно в 3 этапа:

1) Установление принадлежности культуры к серогруппам А, В, С, D, Е, рода Salmonella. При этом используют поливалентную О-сыворотку, содержащую антитела против антигенных рецепторов 2, 3, 4, 7, 9, 10. Монорецепторные О-сыворотки применяют против редких серогрупп. При диагностике паратифа А и В, брюшного тифа можно использовать смесь О-сывороток, сорержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.

2) При положительном рез-те для определения принадлежности испытуемой культуры к определенной серогруппе ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: рецептор 2 относится к серогруппе А, рецептор 4 – к серогруппе В, рецептор 7 – к серогруппе С и т.д.

3) После определения серогруппы, определяем ее видовую принадлежность при помощи р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Затем проводят р-цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.