I. Ме­то­ды вы­де­ле­ния и очи­ст­ки фер­мен­тов

В жи­вой при­ро­де фер­мен­ты на­хо­дят­ся в раз­лич­ных струк­тур­ных об­ра­зо­ва­ни­ях клет­ки – яд­ре, ми­то­хон­д­ри­ях, мем­бра­нах, жид­ких час­тях про­то­плаз­мы, в тка­не­вых со­ках; мно­гие фер­мен­ты вы­ра­ба­ты­ва­ют­ся спе­ци­аль­ны­ми же­ле­за­ми и вы­де­ля­ют­ся в со­ста­ве пи­ще­ва­ри­тель­ных со­ков (в же­лу­доч­ном – пеп­син, в со­ке под­же­лу­доч­ной же­ле­зы – трип­син, ли­па­за, ами­ла­за, маль­та­за, в слю­не – ами­ла­за, в ки­шеч­ном – про­те­о­ли­ти­че­ские фер­мен­ты и фер­мен­ты, рас­ще­п­ляю­щие уг­ле­во­ды, жи­ры и т.д.).

По­сколь­ку фер­мен­ты – ве­ще­ст­ва бел­ко­во­го про­ис­хо­ж­де­ния, для из­вле­че­ния в ос­нов­ном при­ме­ня­ют­ся опи­сан­ные ра­нее ме­то­ды вы­де­ле­ния бел­ков. Од­на­ко встре­ча­ют­ся и спе­ци­фи­че­ские ме­то­ды:

1) На­ло­же­ние фис­ту­лы по Пав­ло­ву – для по­лу­че­ния же­лу­доч­но­го пеп­си­на.

2) Ад­сорб­ци­он­ный ме­тод Да­ни­лев­ско­го ос­но­ван на спо­соб­но­сти фер­мен­тов ад­сор­би­ро­вать­ся на по­верх­но­сти не­ко­то­рых сор­бен­тов (гид­ро­кси­да алю­ми­ния, уг­ля и др.). По­сле взбал­ты­ва­ния рас­тво­ра фер­мен­та с ад­сор­бен­том фер­мент ока­зы­ва­ет­ся свя­зан­ным и ув­ле­ка­ет­ся в оса­док. Оса­док от­де­ля­ют и вы­тес­ня­ют об­рат­но фер­мент с час­тиц сор­бен­та об­ра­бот­кой фос­фа­том на­трия с оп­ре­де­лён­ным зна­че­ни­ем рН, вод­ным рас­тво­ром ам­миа­ка.

Очи­ст­ка фер­мен­тов про­во­дит­ся те­ми же спо­со­ба­ми, что и очи­ст­ка бел­ков, т.е. ме­то­да­ми диа­ли­за, хро­ма­то­гра­фии, кри­стал­ли­за­ции и т.д.

Для оцен­ки го­мо­ген­но­сти по­лу­чен­ных фер­мен­тов, на­ря­ду с тра­ди­ци­он­ны­ми свой­ст­ва­ми, так­же ис­поль­зу­ет­ся оцен­ка ак­тив­но­сти фер­мен­та в той или иной стан­дарт­ной для не­го хи­ми­че­ской ре­ак­ции.