Правила взятия и хранения биоматериала для исследования гемостаза

Кровь для исследования гемостаза получают иглой с широким просветом при венопункции самотеком, натощак. Для исследования некоторых факторов может быть использована капиллярная кровь.

Подлежащая исследованию кровь хранится при температуре 4-8 градусов Цельсия. Охлаждение тормозит активацию свертывающей системы крови и фибринолиза.

Получение плазмы проводится путем декальцинации крови с помощью оксалата или цитрата натрия. Цитрат натрия предпочтительней, так как оксалаты образуют с кальцием нерастворимые соединения, которые ускоряют агрегацию тромбоцитов, активацию фактора V и фактора VIII. Гепарин для стабилизации плазмы для исследования гемостаза не используется. Соотношение крови и стабилизаторов должно быть 9:1 при нормальном гематокрите. Кровь и антикоагулянт быстро смешиваются, не допуская образование пузырьков.

Время центрифугирования крови для получения плазмы:

1. Богатой тромбоцитами составляет 1500 об/мин 5-10 минут

2. Бедной тромбоцитами составляет 3000 об/мин 20 минут

Исследования системы гемостаза и особенно функций тромбоцитов следует проводить в силиконовой или имитирующей силикон посуде. Пробирки для коагулопатических исследований не рекомендуется мыть синтетическими моющими средствами и хромсерной кислотой.

Коагулограмма — необходимый этап исследования свертываемости крови при беременности, перед операциями, а послеоперационном периоде, то есть в ситуациях, когда пациента ожидает некоторая потеря крови. Также гемостазиограмма крови входит в комплекс обследований при варикозном расширении вен нижних конечностей, аутоимунных заболеваниях и болезнях печени.

Свертывание крови — это защитная реакция организма, предохраняющая его от кровопотери. Процесс свертывания регулируется нервной и эндокринной системами. Текучесть крови предотвращает слипание клеток и позволяет им легко перемещаться по сосудам.

Жидкое состояние является необходимым условием выполнения кровью своих функций: защитной, транспортной, трофической (питание тканей), терморегулации и других. Поэтому проходимость сосудов, по которым циркулирует кровь, жизненно важна для организма. Однако при нарушении целостности стенок сосудов кровь должна быть способна к образованию сгустка на пораженном участке. Этот процесс и называется свертываением.

Сочетание способности постоянно сохранять форму жидкости и в то же время образовывать при необходимости сгустки и устранять их обеспечивается наличием в организме системы свертывания крови (гемостаза) и противосвертывающей системы.

Нарушение свертываемости крови, особенно ее повышение (гиперкоагуляция), может привести к опасным последствиям для организма, вызвать инфаркт, инсульт, тромбоз.

Коагулограмма при беременности всегда показывает повышенную свертываемость крови. Для беременности это физиологическая норма.

Время кровотечения (ВК) — это интервал между временем прокола мякоти пальца и остановкой кровотечения. В норме остановка кровотечения наступает на 2-3 минуте от момента прокола и дает представление о функции тромбоцитов. Удлиннение времени кровотечения наблюдается при: наследственных тромобоцитопениях (наследственном снижении числа тромбоцитов); авитаминозе С; длительном приеме аспирина и других лекарств, уменьшающих свертываемость крови (антикоагулянтов).

Адгезия, агрегация и ретракция тромбоцитов. Адгезия — свойство тромбоцитов прилипать к поврежденной стенке сосуда. Индекс адгезивности в норме — 20-50%. Снижение индекса свидетельствует об уменьшении способности прилипать к поврежденному месту и наблюдается при почечной недостаточности, остром лейкозе, некоторых специфических заболеваниях. Агрегация — способность тромобоцитов соединятся. Спонтанная агрегация в норме — 0-20%. Повышение агрегации бывает при атеросклерозе, тромбозах, инфаркте миокарда, сахарном диабете. Снижении агрегации тромбоцитов происходит при снижении количества тромбоцитов или некоторых специфических болезнях. Определение ретракции кровяного сгустка — процесс сокращения, уплотнения и выделения сыворотки крови из начального тромба. В норме индекс ретракции — 48-64%. Его снижение бывает при уменьшении количества тромбоцитов.

Время свертывания крови — это интервал между взятием крови и появлением в ней сгустка фибрина. Норма для венозной крови 5-10 минут. Норма для капиллярной крови: начало 30 секунд — 2 минуты, окончание — 3-5 минут. Увеличение времени свертывания крови происходит за счет недостатка ряда факторов свертывания в плазме крови или действия антикоагулянтов (лекарственных препаратов, уменьшающих свертываемость крови). Бывает при гемофилии или заболевании печени. Уменьшение времени свертываемости отмечается при приеме оральных контрацептивов или после сильных кровотечений.

Протромбиновый индекс (ПТИ) и тромбиновое время. Протромбин — сложный белок, один из важнейших показателей коагулограммы, характеризующий состояние свертывающей системы крови. Он предшественник тромбина (белка, стимулирующего образование тромба). Протромбин синтезируется в печени при участии витамина К. На основании анализа протромбинов можно оценить работу и выявить заболевания печени и ЖКТ. Для характеристики свертывающей системы крови анализ протромбинов является наиболее важным тестом, входящим в гемостазиограмму. Протромбиновое время — это время образования сгустка фибрина в плазме при добавлении к ней хлорида кальция и тромбопластина. Протромбиновое время выражают в секундах. В норме оно равно 11-15 секунд. ПТИ — отношение времени свертывания контрольной плазмы (плазмы здорового человека к времени свертывания плазмы пациента. Выражается в %. В норме пределы колебания протромбинового индекса равны 93-107%. Синтех факторов протромбинового комплекса происходит в клетках печени, при ее заболеваниях количество факторов снижается, и протромбиновый индекс в определенной степени может служить показателем функционального состояния печени. Увеличение ПТИ показывает повышение свертываемости и риск развития тромбозов, но может отмечаться в норме в последние месяцы беременности и при приеме пероральных контрацептивов. Снижение протромбинового индекса говорит о снижении свертывающих свойств крови.

Для образования факторов протромбинового комплекса необходим витамин К. При его дефиците, нарушении всасывания витамина в кишечнике при энтероколитах и дисбактериозе протромбиновый индекс также может снижаться. Большие дозы ацетилсалициловой кислоты, диуретики типа гипотиазида вызывают снижение протромбинового индекса.

Тромбиновое время — время, за которое происходит превращение фибриногена в фибрин. В норме оно равно 15-18 секундам. Увеличение тромбинового времени бывает при тяжелом поражении печени или врожденной недостаточности фибриногена. Укорочение времени свидетельствует об избытке фибриногена или о наличии парапротеинов (особых белков из класса иммуноглобулинов). Этот показатель обязательно контролируют при лечении гепарином и фибринолитиками.

Фибриноген — белок, синтезирующийся в печени и под действием определенного фактора крови превращающийся в фибрин. Сдачу крови на фибрин обычно назначают, если хотят:

1. Определить патологию свертывания крови

2. Провести предоперационное обследование и в послеоперационный период

3. Провести обследование при беременности

4. Проконтролировать кровь при воспалительных процессах.

Норма фибриногена в крови — 2-4 г/л. Увеличение фибриногена свидетельствует о повышении свертываемости и риске образования тромбов и отмечается в конце берменности, после родов, хирургических вмешательств, при пневмонии, острых воспалительных и инфекционных заболеваниях (грипп, туберкулез), в первые сутки инсульта, при инфаркте миокарда, снижении функции щитовидной железы (гипотериозе), ожогах, приеме эстрогенов и оральных контрацептивов, некоторых специфических заболеваниях. Уменьшение фибриногена отмечается при: тяжелых формах гепатита или цирроза печени, серьезных нарушениях в системе свертывания крови, токсикозах беременности, недостатке витамина С или В12, приеме анаболических гормонов, андрогенов, антикоагулянтов (стрептокиназы, урокиназы), рыбьего жира.

Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) — это время, за которое образуется сгусток крови после присоединения к плазме хлорида кальция и других веществ. АЧТВ — наиболее чувствительный показатель свертываемости крови. Норма АЧТВ в среднем 30-40 секунд. Повышенное АЧТВ может наблюдаться при болезнях печени, дефиците витамина К. Если уровень хотя бы одного из факторов свертывания снижет на 30-40% от нормы, то меняется и уровень АЧТВ. Замедление свертываемости крови вследствие увеличения продолжительности АЧТВ происходит при снижении свертываемости крови, гемофилии и некоторых более редких заболеваниях.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

ИФА — исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови, либо антигенов к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни. Результаты ИФА могут выдаваться качественно и количественно.