Мытье и обработка лабораторной посуды

Посуда, используемая для микробиологических исследований, должна быть не только стерильной, но и чистой. Использование грязной посуды может привести к искажению результатов.

Мытье и обработка лабораторной посуды проводится в моеч­ной и имеет свои особенности. Эти особенности заключаются в том, что моющие средства не должны повреждать стекло и остав­лять следы, влияющие на рост и развитие микроорганизмов. На­пример, поцарапанное стекло может дать трещину при стерилиза­ции, а остатки стирального порошка - изменить рост микроорганиз­мов. Поэтому для мытья лабораторной посуды используют хорошо смываемые моющие средства (например, моющее средство «А», применяемое для мытья молочных бидонов), или натуральные про­дукты (например, горчицу).

Для обработки лабораторной посуды используют механичес­кие и химические способы. В качестве механических способов применяют обработку лабораторной посуды с помощью щеточек и ершей различных размеров и конфигураций. При отсутствии ершей хорошие результаты дает использование мелко порезанных кусоч­ков соломы или сена.

Химические способы основаны на применении различных хими­ческих соединений, способствующих удалению органических и неор­ганических веществ с внутренней и внешней поверхности посуды.

Последовательность и технология обработки лабораторной посуды зависит от ее состояния и назначения. Например, мытье новой посуды и посуды, бывшей в употреблении, пипеток и пред­метных стекол имеет свои особенности.

Процедура мытья новой лабораторной посуды направлена на нейтрализацию избытка щелочи, которая могла остаться при из­готовлении стекла. Для этого новую посуду выдерживают в тече­ние 15 минут в горячем растворе моющего средства, промывают водопроводной водой, погружают в 2% раствор соляной кислоты, постепенно нагревают и кипятят в течение 10 минут. Затем посуду тщательно промывают горячей водой, а затем 2-3 раза ополаски­вают дистиллированной водой.

Во время обработки внутренняя поверхность пипеток должна полностью контактировать с моющими средствами. Поэтому с помощью резинового баллончика каждую пипетку заполняют мо­ющими средствами и помещают в высокий цилиндр с уровнем жид­кости выше высоты пипеток или в широкий сосуд в горизонтальном положении.

Использованную лабораторную посуду моют только пос­ле предварительной обработки дезинфицирующими средствами. Сильно загрязненную лабораторную посуду заливают на один час хромовой смесью (рец. 3), которая, являясь сильным окислителем, разрушает органические вещества и остатки дезинфицирующих средств. После обработки хромовой смесью посуду тщательно про­мывают теплой проточной водопроводной водой и многократными порциями дистиллированной воды.

Не очень загрязненную посуду с помощью ершей моют в го­рячем растворе горчицы или моющих средств, а затем также тща­тельно промывают водопроводной и дистиллированной водой.

Использованные пипетки вначале моют в горячем растворе горчицы или моющих средств (при необходимости, для прочистки канала пипетки, используют мандрен из длинной проволоки), а за­тем замачивают на 40 минут в хромовой смеси. После этого пи­петки тщательно промывают водопроводной и дистиллированной водой, а затем с помощью резиновой груши промывают 50% ра­створом этилового спирта.

С хорошо вымытой посуды вода стекает ровной водяной плен­кой, не оставляя капель. Если на стенках посуды остаются висячие капли, то она должна быть повторно вымыта. Вымытую посуду сушат в сушильном шкафу при температуре 100-105°С.

Предметные и покровные стекла, применяемые для приготов­ления препаратов, должны быть чистыми и хорошо обезжиренны­ми. Капля воды, нанесенная на обезжиренное стекло, растекается равномерно, а на плохо обезжиренном стекле распадается на мел­кие капельки. Новые стекла кипятят 15 минут в 1% растворе пить­евой соды или в мыльном растворе, промывают последовательно дистиллированной водой и 0,5% раствором соляной кислоты, и, на­конец, промывают большим количеством дистиллированной воды. Промытые стекла хранят в эксикаторах с притертой крышкой в смеси Никифорова. Стекла можно также хранить в 96° спирте или промытыми и вытертыми досуха.

Предметные и покровные стекла, загрязненные краской и иммерсионным маслом, опускают на 2 часа в хромовую смесь, после чего хорошо промывают водопроводной водой. Затем стекла заливают 5% раствором щелочи, медленно доводят до кипения, кипятят в течение 30 минут, промывают большим количеством водопроводной и дистиллированной воды.

Подготовка и стерилизация посуды

Промытую посуду просушивают и готовят к стерилизации. В верхнюю часть пипеток вставляют ватные тампоны, колбы и пробирки закрывают ватными пробками. Для того, чтобы пробки не выскакивали, их закрывают бумажными салфетками или фольгой.

Пипетки стерилизуют либо по отдельности, либо по несколько штук. Если пипетку стерилизуют отдельно, то ее заворачивают по спи­рали в длинные полоски бумаги, начиная с узкой части. Чаще всего стерилизуют несколько пипеток (не более 10 в одной упаковке). Для этого пипетки помещают в специальный металлический пенал или за­ворачивают в термостойкую (например, микалентную) бумагу.

Аналогично одиночным пипеткам обертывают шпатели, ис­пользуя бумагу большей ширины.

Чашки Петри заворачивают в микалентную бумагу по 4-5 штук. В микробиологической лаборатории используют различные виды стерилизации:

- стерилизация кипячением;

- стерилизация сухим жаром;

- стерилизация паром под давлением;

- стерилизация текучим паром (дробная стерилизация);

- механическая стерилизация.

Стерилизация кипячением является наиболее простым способом стерилизации и используется для обработки стеклянных и металлических предметов, не зараженных спороносными микроорганизмами. Для стерилизации кипячением используют металлический стерилизатор, который заливают холодной дистиллирован­ной водой с добавлением небольшого количества (0,2%-0,4%) соды. Сода значительно повышает стерилизующие свойства кипящей воды

и предохраняет металлические изделия от коррозии.

Дистиллированную воду медленно нагревают до кипения, и с этого момента отсчитывают время стерилизации, которая длится от 30 до 40 минут. После стерилизации стерилизатор остужают, воду сливают, а инструменты берут пинцетом, который кипятился вместе с ними.

Стерилизацию сухим жаром проводят в специальных сушильно-стерилизационных шкафах (сухожаровых стерилизаторах), имеющих соответствующую температурную настройку. Они представляют собою металлические шкафы с двойными стенками, с термоизоляцией и нагревательными приспособлениями. Все шкафы оборудуются специальными устройствами для установки и контроля температуры стерилизации, для регулирования времени стерилизации. Некоторые шкафы оборудованы таймерами и звуковой сигнализацией для оповещения окончания процесса стерилизации.

Сухожаровые стерилизаторы предназначены для стерилизации металлических, фарфоровых и стеклянных предметов при температуре от 160°С до 200°С. Перед стерилизацией предметы помещают в биксы, металлические пеналы или заворачивают в пергамент; фольгу, в термостойкую бумагу. Газетная бумага в мень­шей степени подходит для упаковки стерилизуемых предметов, т.к. не выдерживает высокой температуры и выделяет в окружающую среду продукты разложения типографской краски.

Продолжительность стерилизации зависит от задаваемой температуры. При температуре 150°С она составляет 2 часа, при 160 С -1 час, при 180°С - 30 минут, при 200°С -10-15 минут. Устанавливая температуру стерилизации, следует помнить, что при температуре 170°С бумага и вата начинают желтеть, а при более высокой температуре могут обугливаться.

После окончания стерилизации дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как перепад внутренней и внешней температуры может вызвать растрескивание стеклянной посуды-

Стерилизацию паром под давлением проводят в паровых стерилизаторах (автоклавах). Автоклавы бывают горизонтальные и вертикальные (рис. 32). В лаборатории желательно иметь не менее двух автоклавов. Один используется для стерилизации, во вто­ром - обезвреживают инфицированный материал и культуры мироорганизмов.

Автоклав состоит из двух камер. В наружной (водопаровой) камере происходит образование пара, который поступает во внутреннюю (стерилизационную) камеру. Внутреннюю камеру закрывают массивной крышкой и герметически крепят к кожуху с помощью винтовых соединений.

Уровень давления в авто­клавах устанавливают и контролируют с помощью электроконтактных манометров. Для предохранения от избыточного повышения давления каждый автоклав оборудуется системой предохранительных клапанов. Ввиду того, что автоклав представляет собою сосуд, работающий под давлением, он требует пристального внимания обслуживающего персонала и тщательного ухода. Все особенности его работы и эксплуатации изложены в технической документации, прилагаемой к каждому автоклаву, а персонал проходит специальную подготовку.

Режим стерилизации в автоклавах устанавливают по уровню давления пара, который соответствует определенной температуре его нагрева (табл. 3).

Рис. 32. Автоклав

Время стерилизации определяется характером инфекционного материала, стерилизуемых жидкостей и питательных сред. Например, стерилизацию питательного агара проводят в течение 30 минут при 1,0 атм., обезвреживание («убивку») инфекционного материала осуществляют в течение часа при 1,5 атм. Питательные среды сложного состава, содержащие различные углеводы, индикаторы и другие вещества, стерилизуют в течение 20-30 минут при 0,4 - 0,5 атм.

Для контроля стерилизации внутрь автоклава закладывают запаянные в виде песочных часов тест-ампулы с химическими ве­ществами, которые плавятся при определенной температуре. Для приготовления тест-ампул используют бензонафтол (температура плавления 110°С), антипирин (113°С), резорцин или серу (119°С), бензойную кислоту (120°С). Если температура стерилизуемых предметов достигла необходимого значения, то расплавленное вещество перетекает в нижнюю часть ампулы. После извлечения остывшего материала заполненная нижняя часть ампулы свидетельствует о полноте стерилизации.

Таблица 3

Соотношение давления пара в автоклаве и температуры

Давление пара, атмосферы	Температура внутри стерилизационной камеры, ºС
0,2
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
1,5

В некоторых случаях используют стерилизацию текучим па­ром (дробная стерилизация). Она заключается в том, что обработ­ка паром проводится по 30 минут в течение трех дней. Пар свобод­но проходит через стерилизационную камеру автоклава при закры­той крышке, не создавая давления. После обработки материал не извлекают из автоклава, а оставляют на сутки. За это время на­блюдается прорастание спор оставшихся микроорганизмов, веге­тативные тела которых погибают во время следующего этапа дроб­ной стерилизации. Такую процедуру повторяют трижды. После тре­тьей обработки материал остужают и извлекают из автоклава. Дробная стерилизация позволяет сохранить в питательных средах вещества, разрушающиеся при более высоких температурах

Если питательная среда не выдерживает температуры кипения (например, белковая среда), то дробную стерилизацию проводят при температуре ниже 100°С. Эта разновидность дробной стерилизации предложена Тиндалем и носит название «тиндализация». Она проводится в терморегулируемой водяной бане по часу при температуре 60°С - 65°С в течение 5 дней, или при 70°С - 80°С в течение 3 дней. Между циклами прогревания среду выдерживают при температуре 29°С - 30°С для прорастания спор бактерий, вегетативные формы которых погибают после последующих прогреваний.

Механическая стерилизация осуществляется с помощью мембранной ультрафильтрации. Она применяется для освобождения жидкостей от бактериальных тел, а также для отделения бактерий от вирусов, бактериофагов и экзотоксинов. Для изготовления ультрафильтров используют материалы смикроскопическими порами (асбест, каолин, нитроцеллюлоза, фарфор).