Лабораторная работа. Биохимическая диагностика острого панкреатита

1. Определение активности a-амилазы в крови

Оборудование:	1.	Штатив с пробирками.
	2.	Мерная коническая пробирка.
	3.	Пипетки на 1 мл и 0,1 мл.
	4.	Термостат.
	5.	КФК.
Реактивы:	1.	Крахмальный субстрат.
	2.	Раствор йода.
	3.	Дистиллированная вода.
	4.	Сыворотка крови, моча.

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении уменьшения концентрации крахмала в пробах после ферментативного гидролиза по сравнению с исходным уровнем, что служит мерой активности амилазы.

Ход работы. В 2 пробирки (опытная и контрольная пробы) наливают по 0,5 мл крахмального субстрата. Опытную пробу прогревают при 37^ОС 5 мин, после чего добавляют в нее 0,01мл сыворотки и инкубируют 8 мин при 37^ОС в термостате. Сразу же после инкубации опытной пробы в обе пробирки добавляют по 0,5 мл раствора йода и доводят объем проб до 5 мл дистиллированной водой. Сразу же колориметрируют их при красном светофильтре в кюветах толщиной 1 см против воды.

Активность a-амилазы рассчитывают по формуле:

(Е_К – Е_ОП)/Е_К*150 = г крахмала, гидролизованного 1л сыворотки

за 1 час инкубации (г/л),

где: Е_К – оптическая плотность контрольной пробы,

Е_ОП – оптическая плотность опытной пробы,

150 – коэффициент пересчета на количество крахмала в г, гидролизованного 1 л сыворотки за 1 час инкубации.

Норма активности амилазы в сыворотке – 16-30 г/л в час

2. Определение активности a- амилазы в моче

Работу проводят так же, как с сывороткой крови, только в опытную пробу вместо сыворотки добавляют 0,01 мл мочи, разведенной в 100 раз. При расчете активности фермента в формулу добавляют коэффициент, учитывающий разведение мочи.

Норма активности амилазы в моче – 28-160 г/л в час

Диагностическое значение определения амилазы

Повышение активности амилазы (гиперамилаземия) наблюдается при остром панкреатите. В первые 12 – 24 часа активность амилазы в крови повышается в 10-40 раз, затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6 сутки. При этом активность фермента повышается также в моче (в 10-40 раз) и остается высокой до 7 суток. Гиперамилаземия наблюдается также при остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцати-перстной кишки.

Гипоамилаземия чаще всего свидетельствует о недостаточности экзокринной функции поджелудочной железы. Также встречается у больных гепатитами, циррозами, злокачественными опухолями с метастазами в печень, обширными ожогами кожи, сахарным диабетом, гипотиреозом, при интоксикациях.

Отношение активности амилазы в крови к активности амилазы в моче служит показателем функциональной полноценности почечного фильтра.