Вибір аналітичної довжини хвилі

Ідеальною аналітичною довжиною хвилі є така довжина, на якій одна частинка дуже сильно поглинає світло, а інша – слабо.

Практично аналітичну довжину хвилі слід вибирати за таких умов:

а). максимум кривої поглинання однієї частинки знаходиться над мінімумом кривої поглинання іншої частинки;

б). максимум кривої поглинання однієї частинки знаходяться над максимумом іншої частинки за умови, що різниця в показниках оптичної густини обох частинок не менше чим 0,2;

в). максимум кривої поглинання однієї частинки знаходиться над скатом або плечем кривої поглинання другої частинки;

г). мінімум кривої поглинання однієї частинки знаходиться над мінімумом кривої поглинання іншої частинки.

На цій стадії визначення рК_а треба знову приготувати свіжі розчини із вихідного розчину і знову заміряти оптичну густину обох частинок при аналітичній довжині хвилі. В результаті проведення цих вимірювань отримують величину d₁ і d_м, які використовують в розрахунках рК_а.

На цій стадії визначення рК_а треба пересвідчитись, що концентрація розчину, що дорівнює 10^-4М дійсно є найбільш підходящою. Також на цій стадії визначення рК_а визначаються величини d₁ і d_м з найбільшою точністю.

Визначення приблизного значення рК_а

Вихідний розчин розбавляють, як було вказано вище, таким буферним розчином, в якому досліджуємоа речовина була б тільки частково іонізованою. Ступінь іонізації речовини можна приблизно також оцінити, знаючи константи іонізації найбільш часто зустрічающихся функціональних груп та вплив інших замісників в молекулі речовини на ці константи. На цій стадії визначення рК_а виміряють оптичну густину досліджуємого розчину та розраховують значення рК із відповідного рівняння (1.6 або 1.7).

Точне визначення величини рК_а

Використовуючи отримане вище приблизне значення рК_а, готують 7 буферних розчинів, значення рН яких чисельно рівні:рК_а +0; +02; +0,4; +0,6; -0,2; -0,4; -0,6, відповідно. Після знімання спектрів поглинання цих розчинів одержують ряд, що складається з семи значень рК_а. Всі значення усереднюють. Похибка повинна складати ± 0,06 одиниць. Якщо похибка більше, слід повторити вимірювання.