Окраска по Граму. Механизм окраски. Примеры грамположительных и грамотрицательных бактерий

Окраска по Граму (в модификации Синева):

а) на фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную
генциан-фиолетовым, смачивают водой, окрашивают 2 минуты;

б) снимают бумагу и наносят на мазок раствор Люголя на 1 минуту, затем краситель
сливают;

в) обесцвечивают мазок 96° спиртом 10-15 секунд (до исчезновения сине-
фиолетовых струек);

г) промывают мазок водой;

д) докрашивают фуксином Пфейффера 30 секунд;

е) промывают мазок водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

По отношению к этой окраске все бактерии подразделяются на грамположительные (окрашиваются в сине-фиолетовый цвет) и грамотрицательные (окрашиваются в розово-красный цвет).

К грамположительным микроорганизмам относятся все кокки, кроме нейссерий, и палочковидные бациллы. К грамотрицательньш - нейссерии, неспорообразующие бактерии, вибрионы и спириллы.

Механизм окраски по Граму.

В основе дифференциации микроорганизмов на грамположителъные и грамотрицательные лежат отличия в строении клеточной стенки.

Основой клеточной стенки бактерий является пептидогликан, обусловливаю­щий ее прочность и ригидность. У грамположительных бактерий пептидогликан многослоен, толщиной до 500 А и с ним связаны тейхоевые кислоты. У грамотрицательных бактерий толщина пептидогликана не более 150 А, нет тейхоевых. кислот, но есть наружная мембрана, которая в основном содержит липополисахариды.

Сущность механизма окраски по Граму заключается в следующем: вначале препарат окрашивают генциан-фиолетовым, а затем раствором Люголя, в результате чего образуется комплекс генциан-фиолетовый + йод, и все клетки окра­шиваются в фиолетовый цвет. Последующая обработка спиртом дифференцирует два типа бактерий. У грамположительных бактерий образовавшийся комплекс не вымывается спиртом, что обусловлено прочной связью с тейхоевыми кислотами, плотностью и многослойностью пептидогликана и при докрашивании фуксином Пфейффера они сохраняют фиолетовую окраску. У грамотрицательных бактерий, комплекс генциан-фиолетовый + йод вымывается спиртом, т.к. нет тейхоевых кислот и тонкий слой пептидогликана, поэтому обесцвеченные микробные клетки при бкраске фуксином Пфейффера приобретают красный цвет.