Техника приготовления и окрашивания бактериологического препарата. Принцип простого и сложного методов окраски

Этапы приготовления мазка:

А. Обезжиривание предметного стекла сухим мылом.

Б. Собственно приготовление мазка: а) из бульонной культуры: - прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробку пробирки, обжечь края про­бирки, набрать каплю культуры петлей. Опять обжечь края пробирки и закрыть пробкой. Пробирку поставить в штатив, нанести каплю культуры на предметное стекло и распределить параллельными движениями петли (диаметр мазка -0,5-1 см), прожечь петлю;

2. Техника приготовления и окрашивания бактериологического препарата:
1) Собственно приготовление мазка:

а) с жидкой питательной среды

- на предварительно обезжиренное стекло нанести каплю культуры петлей и распределить ее параллельными движениями;

б) с плотной питательной среды

- вначале на обезжиренное стекло нанести каплю физиологического раствора, затем внести в эту каплю петлей небольшое количество агаровой культуры и также распределить параллельными движениями.

2). Высушивание мазка на воздухе или высоко над пламенем спиртовки. 3). Фиксация мазка:

а) жаром, над пламенем спиртовки - для изучения морфологии бактерий и дифференциации их при окраске сложными методами;

б) химическим методом - для изучения деталей внутреннего строения и для
фиксации мазков крови. В качестве химических фиксаторов чаще используют
этиловый и метиловый спирт, а также смесь Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в соотношении 1:1)

Назначение фиксации:

а) убить микроорганизмы;

б) прикрепить их к предметному стеклу;

в) улучшить их прокрашивание.

4). Окраска препаратов простым или сложным методом.

Принципы простого и сложного методов окраски препаратов, назначение.

Простой метод позволяет изучать форму, размеры и расположение бактерий. При простом методе окраски используют только один краситель, чаще фуксин Пфейффера или метиленовый синий.

Принципиальный рецепт простого водно-спиртового красителя: 1 часть красителя +10 частей 96° этилового спирта +100 частей дистиллированной воды.

Сложные методы позволяют дифференцировать микроорганизмы (окраска по Граму, Цилю-Нильсену) или изучать отдельные структуры клеток (окраска по Бур-ри-Гинсу, Нейссеру, Романовскому-Гимзе), Сложный метод окраски включает ис­пользование двух и более красителей.