Кодеин

Предварительная проба на наличие кодеина в моче. В делительную воронку вносят 50 мл мочи, подщелачивают раствором аммиака до рН=10.0, прибавляют 50 мл хлороформа и взбалтывают в течение 5 минут. Хлороформный экстракт отделяют от водной фазы и данный экстракт реэкстрагирует водой. Водный реэкстракт исследуют одним из способов обнаружения кодеина.

а) на фильтровальную бумагу наносят каплю полученного раствора и прибавляют каплю реактива Марки. При наличии кодеина пятно приобретают красноватую окраску, переходячую в сине-фиолетовую;

б) на фильтровальную бумагу наносят каплю указанного выше спиртового раствора и прибавляют каплю 0,5% раствора ванадата аммония и каплю 2% раствора серной кислоты. При наличии кодеина появляется зеленая окраска, переходящая в синий цвет.

Для подтверждения результатов указанных реакций необходимо провести обнаружение кодеина в экстракте методом хроматографии в тонком слое.

Реакция Пеллагри. При нагревании кодеина с концентрированной хлороводородной кислотой, а затем концентрированной серной кислотой, происходит деметоксилирование этого алкалоида и образуется апоморфин, который дает реакцию со спиртовым раствором йода.

Обнаружение кодеина по УФ- ИК- спектрам: Раствор кодеина в этиловом спирте имеет максимум поглощения при длине волны равной 285 нм. В ИК- области спектра основание кодеина (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1052. 1268, 1500 см-¹.

Экстракционно-фотометрический метод определение кодеина. Метод основана реакции с тропеолином 00, при которой образуется ионный ассоциат, экстрагирующийся хлороформом.

С помощью этиого метода можно определить от 0,2 до 1,0 мкг кодеина в пробе.

В настоящее время при выполнении аналитических задач широко стали применяться методы газожидкостной и жидкость-жидкостной хроматографии. Преимуществами указанных методов заключается в том, что данные методы, при определенных статических условиях позволяет по индексам удерживания идентифицировать вещества, а также по интенсивности аналитических сигналов вычислить концентрации определяемого вещества. Параллельно проводится определение с рабочим раствором стандартного образца исследуемого вещества.

Как пример. Приводим один из вариантов определения основных алкалоидов опия, входящих в состав омнопона.

Методика. 2 мл 1% или 1 мл 2% препарата помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и добавляют раствор подвижной фазы до метки и перемешивают.

По 10 мкл приготовленного раствора и раствора суммарного стандартного образцов алкалоидов опия попеременно хроматографирует на жидостном хроматографе с УФ детектором, получая не менее 5 хроматограмм для каждого из растворов, следующих условиях:

- колонка Symmetry C18, размером 150 х 3.9 мм с размером частиц 5 мкм или аналогичная, для которой выполняется требование теста «Проверка пригодности хроматографической системы»;

- подвижная фаза (ПФ): ацетонитрил-0,4 М раствор аммония перхлората, доведенный до рН = 3,0 кислотой ортофосфорной концентрировнной-вода (3:10:7), дегазированная дюбым удобным способом;

- скорость подвижной фазы – 1,5 мл/мин;

- детектирование при длине волны 280 нм;

- температура колонки - 40°С;

Градиент по следующей схеме:

от 0 до 6 мин – изократическое элюирование с ПФ;

от 6 до 7 мин – линейный градиент до соотношения ПФ к ацетонитрилу (85:15);

от 7 до 14 мин - изократическое элюирование соотношения ПФ к ацетонитрилу (100:0):

от 14 до 15 мин - линейный градиент соотношения ПФ к ацетонитрилу (85:15);

от 15 до 20 мин - изократическое элюирование с ПФ.

Порядок выхода пиков на хроматограмме исптуемого раствора – морфина гидрохлорид, кодеин, тебаин, наркотин, папаверина гидрохлорид.

Содержание морфина гидрохлоида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида (Х) в 1 мл препарата в граммах вычисляют по формуле:

Х = S₁· m₀ · 5 ·10 · (100-W₀) · P / S₀ · 50 · V · 100 · 100, где

S_{1 –} среднее значение площадей пиков морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида, вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора. сдляоответственно;

S_{0 -} - среднее значение площадей пиков морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида, вычисленное из хроматограмм РСО, соответственно;

W₀ - потеря в массе при высушивании РСО морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида в процентах, соответственно;

Р – содержание морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида в РСО, в пересчете на сухое вещество в процентах, соответственно;

m₀ - масса навески морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида взятая для приготовления суммарного РСО, в граммах, соответственно;

V – количество испытуемого раствора, в миллилитрах.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняется требование теста «Проверка пригодности хроматографической системы»по следующим пунктам:

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида из хроматограмм раствора суммарного РСО должно быть не менее 100 т.т. (ГФ Х1, вып. 1, с. 105);

- относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площадей пиков морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида из хроматограмм раствора суммарного РСО должно быть не более 2% (ГФ Х1, вып. 1, с. 105);

- степень разделение пиков рассчитанная для пиков морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида из хроматограмм раствора суммарного РСО должно быть не более 1,5% (ГФ Х1, вып. 1, с. 105);

- коффициент ассиметрии пика рассчитанная по пику морфина гидрохлорида, или кодеина, или наркотина, или папаверина гидрохлорида из хроматограмм раствора суммарного РСО должен быть не более 1,7% (ГФ Х1, вып. 1, с. 105);

Коэффициент ассиметрии пика (Т) рассчитывают по формуле Т = m_0,5 ·/ (2 ·f),

где m_{0,5 –} ширина пиков на высоте 5% от базовой линии, в миллиметрах;

f – расстояние от начало пика на высоте 5% от базовой линии до перпендикуляра, проведенного из его вершин, в миллиметрах.