Изолирование барбитуратов водой, подкисленной щавелевой кислотой

Оптимальные условия изолирования барбитуратов из биологического материала водой, подкисленной щавелевой кис­лотой, и способ очистки полученных вытяжек разработала М. Д. Швайкова с сотрудниками. Согласно этому методу, в кони­ческую колбу или стакан вносят 100 г тщательно измельченных органов трупов, прибавляют 200 мл воды, подкисляют насыщен­ным водным раствором щавелевой кислоты до рН = 2 (по универ­сальному индикатору) и оставляют на 2 ч при частом перемеши­вании. Затем содержимое колбы переносят в стакан для центри­фугирования вместимостью 500 мл и центрифугируют в течение

30 мин (3000 об/мин). Центрифугат сливают с осадка и проце­живают через ватный тампон. Процеженную жидкость собирают в делительную воронку и проверяют рН этой жидкости. В случае необходимости жидкость доводят до рН = 2. Содержимое дели­тельной воронки взбалтывают с тремя порциями хлороформа (по 20, 15 и 15 мл) в течение 5 мин. Если образуется эмульсия, то ее разрушают центрифугированием.

Хлороформные вытяжки соединяют, доводят хлороформом до 50 мл и переносят в делительную воронку, в которую прибавля­ют 25 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрия, и взбалтывают. Водную фазу отделяют от хлороформной вытяжки. Эту вытяжку взбалтывают с двумя порциями воды по 1,5 мл. Первую и вторую порции воды (по 1,5 мл), которыми промывали хлороформные вытяжки, присоединяют к щелочной водной фазе. Потом водную фазу подкисляют хлороводородной кислотой до рН = 2, вносят в делитель­ную воронку и взбалтывают с двумя новыми порциями хлоро­форма (по 20 мл) в течение 5 мин. Хлороформные вытяжки со­единяют и доводят хлороформом до 50 мл. В этих вытяжках опре­деляют наличие и количественное содержание барбитуратов.

2. Изолирование барбитуратов водой, подкисленной серной кис­лотой.

Метод выделения барбитуратов из биологического мате­риала, основанный на изолировании этих веществ водой, подкис­ленной серной кислотой, разработала В. И. Попова. Согласно этому методу, биологический материал настаивают с водой, под­кисленной серной кислотой (рН = 2...3). Полученные вытяжки освобождают от примесей методом гель-хроматографии. Для этой цели используется гель сефадекса G = 25.

В стакан вносят 100 г измельченного биологического материа­ла, прибавляют 80 мл 0,02 н. раствора серной кислоты, переме­шивают и проверяют рН среды. При необходимости смесь доводят до рН = 2...3 (по универсальному индикатору) 30 %-м раствором серной кислоты. Смесь биологического материала и подкисленной воды настаивают в течение 2 ч при частом перемешивании. Затем вытяжку сливают, а биологический материал еще 2 раза настаи­вают с новыми порциями 0,02 н. раствора серной кислоты (по 80 мл) в течение 1 ч. Кислые водные вытяжки соединяют, про­цеживают через сложенную в три слоя марлю и центрифугируют в течение 25—30 мин.

Надосадочную жидкость (центрифугат) сливают с осадка и очищают от примесей методом гель-хроматографии. Этот метод обеспечивает хорошую очистку барбитуратов, выделенных из биологического материала.

После очистки вытяжек из биологического материала с по­мощью метода гель-хроматографии получают большие объемы элюатов, в одном миллилитре которых содержатся малые коли­чества барбитуратов. Поэтому барбитураты, находящиеся в элюатах, подвергают экстракционному концентрированию. С этой целью объединенные кислые элюаты 3 раза взбалтывают с новы­ми порциями хлороформа (по 50 мл) в течение 7 мин. Хлороформ­ные вытяжки, полученные после каждой экстракции, соединяют и на водяной бане при 70 °С отгоняют из них 120—130 мл хлоро­форма. Оставшуюся упаренную хлороформную вытяжку при ком­натной температуре выпаривают досуха. Сухие остатки исполь­зуют для идентификации и количественного определения бар­битуратов при помощи соответствующих реакций и методов.

3. Изолирование барбитуратов подщелоченной водой.

Подщело­ченную воду для изолирования барбитуратов из биологического материала впервые применил П. Валов. Для осаждения приме­сей, переходящих из биологического материала в вытяжки, он использовал вольфрамат натрия. В настоящее время известно несколько модификаций метода Валова. Одна из модификаций метода Валова, предложенная М. Д. Швайковой с сотрудниками, приводится ниже.

В стакан или в коническую колбу вносят 100 г измельченного биологического материала, прибавляют 180 мл воды и 20 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия. Содержимое стакана (или колбы) оставляют на 30 мин при частом перемешивании, а за­тем центрифугируют в течение 30 мин (3000 об/мин). От осадка отделяют надосадочную жидкость (центрифугат), к которой при­бавляют 120 мл 10 %-го раствора вольфрамата натрия и 1 н. ра­створ серной кислоты (до рН = 2). Жидкость нагревают на кипя­щей водяной бане в течение 20 мин, а затем подвергают центри­фугированию (30 мин). Центрифугат сливают с осадка и проце­живают через ватный тампон, смоченный водой. Процеженную жидкость собирают в делительную воронку. Тампон промывают водой (10 мл). Промывную воду тоже выливают в делительную воронку. К процеженной жидкости прибавляют равный объем диэтилового эфира и взбалтывают в течение 15 мин. Эфирный слой отделяют и взбалтывают с 50 мл 10 %-го раствора гидро­ксида натрия. Щелочной водный слой отделяют, подкисляют 25 %-м раствором серной кислоты до рН = 2 и взбалтывают с равным объемом диэтилового эфира. Полученную при этом эфирную вытяжку используют для обнаружения и количествен­ного определения барбитуратов.

4. Отдельные представители токсических соединений,
извлекаемых хлороформом из кислой вытяжки

Токсическим веществам, экстрагируемых хлороформом из кислой водной вытяжки биологического материала относятся препараты барбитуровой кислоты, некоторые алкалоиды слабоосновными свойствами – кофеин, теобромин, теофиллин, наркотин, стрихнин и бруцин, меконовая кислота и меконин, салициловая кислота, фенацетин, синтетические препараты группы пиразола – антипирин, амидопирин, препараты группы 1,4 – бензодиазепина, ноксирон и др.