анаэробных бактерий

Одним из основных требований при культивировании анаэробных бактерий является удаление кислорода из питательной среды. Пониженное содержание кислорода создают самыми разнообразными способами: заливкой вазелинового масла на поверхность питательной среды, посевом микроорганизмов в глубину плотной питательной среды, использованием специальных аппаратов-анаэростатов.

Первый день. Исследуемый материал сеют в среду Китта – Тароцци (среду накопления): концентрированный МПБ или бульон Хоттингера, глюкоза, 0, 15% агар (рН 7,2 – 7,4). На дно пробирки для адсорбции слоем 1 – 1,5 см и заливают 6 – 7 мл среды. Среду перед посевом необходимо прогреть в кипящей водяной бане в течение 10 – 20 мин для удаления растворенного в ней кислорода воздуха, а затем охладить. При выделении споровых форм анаэробов засеянную среду вновь прогревают при температуре 80 С в течение 20 – 30 мин для уничтожения неспоровых форм бактерий. Посевы заливают вазелиновым маслом и помещают в термостат.

Второй день. Учитывают изменения, происшедшие в среде накопления, а именно: появление помутнения или помутнение и газообразование. Бульонную культуру набирают пастеровской пипеткой, которую опускают через слой вазелинового масла на дно пробирки. Мазки готовят на стекле обычным способом, фиксируют в пламени и окрашивают по Граму. При микроскопии регистрируют наличие грамположительных палочковидных форм (со спорами или без них). Пересев из среды накопления делают на плотные питательные среды. Изолированные колонии получают двумя способами.

Подготавливают три чашки с кровяно-сахарным агаром.

Выращивают анаэробные микроорганизмы в глубине плотной питательной среды (метод последовательных разведений Вейнберга).

На третий день изучают образовавшиеся в чашках изолированные колонии и из более типичных делают мазки. Остаток их сеют в среду Китта – Тароцци, для накопления чистой культуры, которую затем идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным и др. свойствам.