Генотипические методы исследования в диагностике инфекционных болезней и в идентификации микроорганизмов. Молекулярная зондовая гибридизация нуклеиновых кислот. ПЦР

Для идентификации чистой культуры вместе с бактериологическим методом используют иммунологический метод, который направлен на изучение антигенной структуры выделенной культуры. В настоящее время широко используются генотипические методы, основанные на определении гомологии ДНК искомого микроорганизма в исследуемом материале, с эталоном ДНК. С этой целью используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и генетические зонды, сэндвичгибридизацию. Для постановки ПЦР ДНК - праймер – короткую однонитевую последовательность нуклеотидов, комплементарную начальному и конечному участку ДНК, - в избытке добавляют к нуклеиновой кислоте выделенной из исследуемого материала. После этого проводят гибридизацию. При наличии искомого гена происходит его гибридизация с праймером. После добавления ДНК- полимеразы и нуклеотидов начинается достраивание ДНК.

Зонд – плазмидная ДНК с интегрированным в нее фрагментом ДНК, меченным контрастным веществом или радиоактивной меткой. Меченный зонд вместе с исследуемым материалом наносится на мембранный фильтр, после чего определяется степень его гомологии и исследуемой ДНК. Данный метод дает возможность быстро определить в исследуемом материале ДНК тех или других микроорганизмов и поставить диагноз.