Определение бактерий группы кишечной палочки (БГКП)

Метод определения БГКП основан на обнаружении образования газа и кислоты при высеве определенного количества продукта (или смыва с его поверхности) в жидкие питательные среды, содержащие лактозу (среда Кесслера) с последующим подтверждением принадлежности выросших микроорганизмов к группе кишечных палочек по морфологическим и культуральным признакам.

Исследование на наличие БГКП проводят в несколько этапов:

1 этап - приготовление разведений продукта. Если продукт плотный (колбаса, сыр, масло, творог и т. д.), то результат выражают в отсутствии БГКП в определенной его массе (г). Если продукт жидкий (молоко, кисломолочные напитки, сок и т. д.), го БГКП должны отсутствовать в определенном его объеме (см³).

2 этап - посев определенного количества продукта или его разведений в среду Кесслера. Среду Кесслера разливают в пробирки или колбы, в которые помещают поплавок (стеклянная трубочка с одним запаянным концом). После стерилизации поплавок должен быть заполнен средой.

В пробирки со средой Кесслера вносят по 1 см³ соответствующего разведения продукта (10^-1; 10^-2; 10^-3) и ставят их в термостат при температуре 37±1 °С. Через 24 ч инкубации посевы просматривают и отмечают образование газа в поплавке и изменение цвета среды из фиолетового в желто-зеленый. Записывают, в каких разведениях произошло газообразование.

3 этап - подтверждение принадлежности микроорганизмов, выросших на среде Кесслера, к БГКП. Из забродивших пробирок со средой Кесслера делают пересев петлей на поверхность плотной среды Эндо таким образом, чтобы получить изолированные колонии. Бактериологической петлей берут минимальное количество исследуемого материала из пробирки и высевают его на поверхность ПС. Чашки Петри подписывают и помещают в термостат (крышками вверх) с температурой 37±1 °С на 18-24 ч.

После инкубации чашки просматривают. Бактерии группы кишечных палочек образуют на среде Эндо красные или розовые блестящие колонии с металлическим блеском или без него. Такой характер роста на среде Эндо эти бактерии дают за счет сбраживания лактозы и образования кислоты, вызывающей восстановление индикатора фуксина, окрашивающего колонии.

При наличии на среде Эндо типичных колоний из них готовят препараты, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Если в препарате обнаруживаются мелкие грамотрицательные, неспорообразующие палочки, то делают заключение о том, что обнаруженные в продукте микроорганизмы относятся к БГКП. При этом указывают навеску продукта (в г) или объем (в см³). При отсутствии на среде Эндо типичных для БГКП колоний продукт считают не загрязненным кишечными палочками.