Реакция торможения миграции лейкоцитов

Реакция ставится с целью выявления лимфоцитов, сенсибилизированных к предполагаемому аллергену. Сенсибилизированные лимфоциты при взаимодействии со специфическим аллергеном выделяют медиаторы (ФПМЛ, МИФ), подавляющие подвижность других лейкоцитов. Чаще всего РТМЛ используется для выявления аллергии к лекарственным препаратам. Наиболее доступным является капиллярный метод постановки реакции, для которого используется кровь больного, стабилизированная гепарином. Для постановки реакции предварительно готовятся разведения испытуемого лекарственного препарата от 1/25 до 1/200 на среде 199. В лунки планшета вносят по 400 мкл крови, в которые добавляют по 100 мкл каждого разведения лекарственного препарата. В контроле лекарственный препарат заменяют средой 199. Из каждой лунки заполняют приготовленными смесями по три капилляра до 2/3 их длины. Один конец капилляров закрывают пластилином, после чего их помещают в центрифужные пробирки, на дне которых находится ватный тампон (во избежание поломки капилляров). Пробирки центрифугируют при 1500 об/мин 5 мин для осаждения клеток в капиллярах на «линию старта», после чего инкубируют в термостате при 37°С 18-24 часа. Учет результатов проводится при микроскопии капилляров с малым увеличением, измеряя длину миграции клеток в каждом капилляре. Для оценки полученных результатов рассчитывают процент торможения миграции (ПТМ) следующим образом:

длина миграции с аллергеном

Процент миграции (ПМ) = —————————————— х 100

длина миграции в контроле

ПТМ= 100 – ПМ

РТМЛ считается отрицательной, если ПТМ составляет 20-30%, слабо положительной - при 30-40%, положительной – при значениях >40%.