Робота 10. Отримання перевивної калюсної культури

Первинний калюс, що утворився на експлантатах через 4-6 тижнів, переносять на свіже живильне середовище - перевивають (субкультивують). Розмір трансплантата при культивуванні на агаровому середовищі коливається від 60 до 100 мг маси тканини на 30-40 мл живильного середовища.

Мета роботи: наростити калюсну тканину і отримати перевивну культуру.

Матеріали і обладнання: чашки Петрі з експлантатами, на яких утворився калюс, чашки Петрі зі стерильним середовищем для калюсу (табл. 8), пінцети, скальпелі, стерильні чашки Петрі, спирт, спиртівка, ламінар-бокс, парафілм.

ХІД РОБОТИ

1. Експлантат з первинним калюсом перенести у стерильну чашку Петрі.

2. Притримуючи експлантат пінцетом, скальпелем зрізати калюс.

3. Скальпелем поділити калюсну тканину на рівні фрагменти, які перенести на свіже живильне середовище.

4. Підписати чашку Петрі і закрити парафілмом.

5. Чашки культивувати у термостаті при 25⁰ + 1⁰С.

6. Через 4-6 тижнів від нарослої калюсної тканини відділити шматочки агарового середовища, а калюс розділити на рівні фрагменти, які перенести на свіже живильне середовище для калюсу.

Для підтримання калюсної культури дану операцію необхідно проводити кожні 4-6 тижнів.

Період субкультивування встановлюють для кожної культури експериментально.