З калюсної тканини

Мета роботи: набуття навичок по отриманню клітинних суспензій; отримати суспензійну культуру картоплі (тютюну, топінамбура тощо).

Матеріали і обладнання: калюсна культура картоплі (тютюну, топінамбура тощо), вирощена на середовищі для калюсу №1 (табл. 8), колби Ерленмейера на 250 мл з рідким (без агару) середовищем для калюсу №1 (100 мл середовища на колбу), стерильні чашки Петрі, фольга, пінцети, скальпелі, спирт, спиртівка, ламінар-бокс, шейкер, стерильні лійки з нейлоновими фільтрами.

ХІД РОБОТИ

1. Перенести шматочки калюсної тканини у стерильну чашку Петрі.

2. Стерильним пінцетом подрібнити калюс на фрагменти.

3. Фрагменти калюсної тканини помістити у колби Ерленмейера з рідким живильним середовищем (2-3г/100 мл).

4. Колби з рослинним матеріалом культивувати у темряві на шейкері при 120 об/хв.

5. Через 10-14 днів середовище з клітинною суспензією профільтрувати через нейлон.

6. Фільтрат розділити на 3 порції, які розлити у стерильні колби Ерленмейера.

7. До клітинної суспензії додати свіже середовище, довести об’єм до 100 мл.

8. Колби з суспензійною культурою знову помістити на шейкер.

9. Субкультивування клітинної суспензії проводити кожні 14-18 днів.

Для цього у ламінар-боксі із колби з клітинною суспензією забрати 50-60 мл (» 2/3 об’єму) середовища з клітинами і замінити свіжим середовищем того ж складу. Відібране середовище перенести у стерильну колбу Ерленмейера і свіжим середовищем довести об’єм до 100 мл.