Главная Случайная страница Контакты | Мы поможем в написании вашей работы! | ||
|
Прямая детекция мутаций возможна и для нуклеотидных мутаций ДНК, изменяющих сайты узнавания соответствующих рестриктаз. При серповидноклеточной анемии, вследствие мутационной замены в 6 кодоне гена [з-гемоглобина аденина (А) на тимин (Т), нормальная нук- леотидная последовательность, узнаваемая ферментом Mst II (CCTNTGG), изменена на последовательность, уже не распознаваемую данным ферментом (CCTNAGG). В норме (ра) рестрикцией и гибридизацией с ДНК-зондом в данном регионе гена выявляется фрагмент длиной 1.15 Кб, тогда как при описанной мутации Саузерн-блотом определяется фрагмент (р5) размером 1.35 Кб. Таким образом, при блот-гибридизации могут быть четко дифференцированы нормальные гомозиготные индивиды (АА), гетерозиготы (AS) и гомозиготы по серпо- видноклеточной мутации (SS); при этом каждый из трех генотипов может быть точно определен.
Следующий подход к ДНК-диагностике - аллель-специфическая амплификация (или в другом варианте - гибридизация) нормальной и мутантной^ДНК-последовательности проиллюстрируем на исследовании одной из основных мутаций в гене фенилаланингидроксилазы (R408W: однонуклеотидная мутация приводит к замене в белковом продукте кодируемой аминокислоты), приводящей к фенилкетонурии (Dvorakova D. et al1993). Для исследования используются два ДНК-праймера} фланкирующих исследуемый 12-ый экзон гена (праймеры А и В), а также олигонуклеотидные праймеры, комплиментарные нормальной (праймер S) и мутантной последовательности (прай- мер М) в локусе 408 (рис. 20).
Дата публикования: 2014-11-03; Прочитано: 521 | Нарушение авторского права страницы | Мы поможем в написании вашей работы!